[發明專利]免疫佐劑

有效

• 申請號: 200680050185.0
• 申請日: 2006-01-06
• 公開（公告）號: CN101355964A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 大野忠夫;內村英次
• 申請（專利權）人: 細胞醫藥股份有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 耿小強

技術領域

本發明涉及一種免疫佐劑。

背景技術

以往，常用的大部分免疫佐劑在生物體中給藥的部位起兩種作用：(1)抗原保持以不快速擴散的水性或油性乳劑的性狀，且抗原緩緩釋放，有效地供給免疫載體細胞，(2)引起炎癥反應，使集合于炎癥部位的免疫載體細胞活化。近年來，清楚了抗原提呈細胞在誘導產生抗體的液性免疫反應和誘導殺傷T細胞的細胞性免疫反應任意一種均起到免疫反應中心的作用，并且作為抗原提呈細胞，有樹突狀細胞、巨噬細胞和B細胞。其中，樹突狀細胞具有最強的抗原提呈能力(DendriticCells，second?edition，ed.Lotze，M.T.and?Thomson，A.W.，Academic?Press，SanDiego，2001)。將可有效活化抗原提呈細胞的物質與抗原一起施加給生物體，該物質作為免疫佐劑作用，在液性免疫反應和細胞性免疫反應任意一種均可以有效誘導增強針對抗原的免疫反應。

盡管以往已經了解了很多種免疫佐劑，然而在人腫瘤的治療和以預防轉移和復發為目的的腫瘤免疫療法中可以使用的安全且價格低廉的免疫佐劑卻很少。例如，在利用培養樹突狀細胞的腫瘤免疫療法中，使用了鑰孔嘁血藍蛋白作為免疫佐劑(Geiger，J.D.，等人，Cancer?Res.，61，pp.8513-8519，2001)，但該物質價格很高。現在也提出了施以直接活化樹突狀細胞的粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage?colony?stimulating?factor：以下簡稱為“GM-CSF”的情況)等細胞因子類作為免疫佐劑的方法，但是細胞因子類的價格更高。

在用于針對傳染病的對抗措施的疫苗的制備中，作為安全且價格低廉的免疫佐劑，一直使用的是像氫氧化鋁(Alum)、弗氏不完全佐劑(Freund’s?imcompleteadjuvant，這種佐劑由于是油性，因此一直擔心毒性問題)，或Montanide等這樣的活性不充分的免疫佐劑。這些佐劑如果與動物實驗中使用的弗氏完全佐劑(Freund’s?complete?adjuvant：以下將其簡稱為“FCA”的情況)和Ribi佐劑系統(Ribi?Adjuvant?System)相比，毒性低的免疫佐劑活性也低。

通過硫酸銨沉淀法純化結核菌感染例檢測用結核菌素，尤其是結核菌素中的蛋白成分獲得的純化結核菌素(以下存在簡稱為“PPD”的情況)，由于即使對人重復給藥也極為安全，而且便宜，因此在全世界普及。本發明人發現可以使用PPD作為免疫佐劑使用(PCT/JP00/00692)。而且，本發明人還通過將PPD制成經可溶性蛋白與粘多糖的凝聚獲得的沉淀物，在經物理手段使之變性的腫瘤組織內給藥，發現制成用于誘導抗腫瘤免疫反應的有效免疫佐劑(日本專利第3492671號)。該免疫佐劑具有比溶解狀態的PPD更高的免疫佐劑活性，與溶解狀態的PPD同樣具有極高的安全性。可是，若與FCA和內毒素的主要成分-脂多糖(以下存在將其簡稱為“LPS”的情況)相比，其免疫佐劑活性并不充分。

可以吞噬微粒狀的抗原的未成熟的抗原提呈細胞在末梢血中流動。已知的是，如果在體外培養中的未成熟的抗原提呈細胞中添加LPS，則成熟增進，顯示出強力的抗原提呈能力。該過程中活化的抗原提呈細胞釋放出GM-CSF、白細胞介素(以下，存在簡稱為“IL”的情況)-12、干擾素γ(以下存在將其簡稱為“IFNg”的情況)等各種細胞因子。GM-CSF自身為樹突狀細胞的生存所必需的細胞生長因子，因此一旦活化的樹突狀細胞由于GM-CSF的自分泌機制，因此長期保持活化狀態而可繼續存活下去。樹突狀細胞以及巨噬細胞是由相同的造血干細胞分化的同一系統的抗原提呈細胞，一旦受到免疫刺激，則與樹突狀細胞一樣產生GM-CSF等細胞因子。

實際上，通過以固體化微粒化的腫瘤組織作為抗原，與GM-CSF等細胞因子一起在體內給藥，可以有效誘導針對腫瘤細胞的抗腫瘤免疫反應(PCT/JP00/00692)。該事實表明，在GM-CSF自身形成免疫佐劑的同時，受到免疫佐劑的刺激的抗原提呈細胞所產生的GM-CSF的量可以作為表示原免疫佐劑的活性的指標。也就是說，通過定量人來源的抗原提呈細胞產生的GM-CSF，可以在不使用人個體的體外實驗系統中推定在人體中的免疫佐劑活性。