[發明專利]制備樣品的方法

無效

• 申請號: 200680043398.0
• 申請日: 2006-09-20
• 公開（公告）號: CN101351692A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發明（設計）人: M·佩魯特;F·安布斯;F·德尚
• 申請（專利權）人: 西斯托萊克斯公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;A61K35/12;B01D11/02
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司
• 代理人: 王磊;過曉東

技術領域

本發明涉及組織學領域，特別是制備樣品的方法。

背景技術

組織學是對生物組織的形態和組成的微觀研究。特別是對于建立可能對病人 的治療進行定位的診斷來說，這項研究非常重要。在對生物組織的微觀研究之前， 通常將其包埋入在室溫下為固態的基質中，然后制備成具有幾微米數量級厚度的 薄切片，最后進行染色反應，所述染色反應可以識別組織的不同成分。

制備用于微觀檢驗的生物組織的領域中的標準方法早已有描述，例如已在M. Langeron的書籍“Précis?de?microscopie”，Ed.Masson?and?Cie，巴黎，1942；或者 P.Ganter和G.Jolies的書籍″Histochimie?normale?et?pathologique″Ed. Gauthier-Villars，巴黎1969中描述。設計包埋以允許由待檢驗的組織片制備薄且規 則的切片。最廣泛使用的包埋介質是石蠟。石蠟為疏水性，樣品應進行脫水，通 常通過在濃度增加的乙醇浴中浸漬，然后再在甲苯和二甲苯浴中浸漬來進行脫水。 隨后將樣品置于包含熔化的石蠟的浴中，隨后石蠟滲入整個組織片，此方法是公 知的浸漬法(impregnation)。組織片冷卻后將其成型為固體石蠟塊，生物組織片包 埋在其中。隨后用切片機(microtome)制備石蠟塊的切片，所述切片機能制備通常 為1-3μm厚的薄切片。

將這些切片置于載玻片上并染色。染色劑通常為水溶性的，因此在染色前必 須將切片再水合，以使得它們處于可以進行組織學染色的狀態。再水合通過從切 片中除去石蠟而進行，其通過將切片在甲苯或二甲苯浴中浸漬，然后在濃度漸減 的醇浴中浸漬，最后在水中浸漬來進行。

染色前的切片制備(除去石蠟和水合)使用了大量有機溶劑，特別是醇、甲苯或 二甲苯，由于所述溶劑在使用以及隨后的處置或回收上受監管限制，從而導致高 成本。

已知應用的趨勢及監管使有機溶劑的應用減少甚至停止使用。與過去幾十年 年經常使用但現在其應用受嚴格的監管的某些溶劑例如苯或氯仿類似，例如甲苯 或二甲苯的溶劑的應用恐怕在將來也會受到極為嚴格監管限制。

因此需要以減少有機溶劑的使用或不使用有機溶劑為目的的制備用于醫學分 析的樣品的新方法。

發明內容

本發明的目的是提供處理包埋在固體基質中的生物組織，特別是包埋在石蠟 中的脫水組織的薄切片的方法，從而制備不含所述基質，并處于物理化學狀態， 特別是水合或用水溶性物質浸漬的狀態的組織，這使得它們適于被組織學染色。

已知處于純物質狀態和混合物形式的有機溶劑的實例，其在制備用于組織學 分析的樣品的領域的應用已被評價，并且其適于代替甲苯或二甲苯。特別要提到 的是二噁烷、氯仿、甲基環己烷或脂肪族烴。已知這些溶劑存在毒性問題和/或由 于易燃而導致的處理過程中的安全性問題。此外，本領域技術人員已知使用這些 溶劑處理的樣品的質量遠低于使用甲苯的標準方法處理獲得的樣品。

在越來越多的申請中使用壓縮流體，特別是液體或超臨界二氧化碳，用于許 多方法，其中它們可以有利地代替有機溶劑。

首先給出流體的各種狀態及其處于這些狀態下的性質的概述。已知通常認為 物質有三種狀態，即固態、液態或氣態，通過改變溫度和/或壓力，可以從一個狀 態轉換至另一狀態。除了固態以外，液態和氣態的存在由蒸發/冷凝曲線劃分；并 且存在一個點，超過該點就可以從液態轉換到氣態或蒸汽狀態而不發生沸騰，或 相反地不發生冷凝，該點被稱為臨界點。