[發明專利]噬菌體展示多肽的選擇性翻譯后修飾

無效

• 申請號: 200680038207.1
• 申請日: 2006-10-11
• 公開（公告）號: CN101287830A
• 公開（公告）日: 2008-10-15
• 發明（設計）人: 曹蘿麟;田豐;P·舒爾茨
• 申請（專利權）人: 斯克利普斯研究院
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12P21/04;C12Q1/70
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司
• 代理人: 范征

1.一種嗜菌體，其含有一種多肽，所述多肽含有至少一種翻譯后修飾的芳基-疊氮化物非天然氨基酸殘基，其中所述翻譯后修飾的芳基-疊氮化物非天然氨基酸殘基通過施陶丁格連接反應產生。

2.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述嗜菌體是存活的。

3.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述嗜菌體是絲狀嗜菌體。

4.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述嗜菌體是M13-衍生的嗜菌體。

5.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述多肽是融合多肽。

6.如權利要求5所述的嗜菌體，其特征在于，所述融合多肽含有位點特異性蛋白酶可特異性切割的肽接頭蛋白酶識別序列。

7.如權利要求6所述的嗜菌體，其特征在于，所述位點特異性蛋白酶選自：凝血因子Xa、凝血因子XIa、激肽釋放酶、凝血酶、凝血因子XIIa、膠原酶或腸激酶。

8.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述芳基-疊氮化物非天然氨基酸殘基是對-疊氮基-L-苯丙氨酸殘基。

9.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述嗜菌體固定在固體支持物上。

10.多個如權利要求1所述的嗜菌體。

11.多個如權利要求1所述的嗜菌體，其中所述多個嗜菌體展示多種不同多肽。

12.如權利要求11所述的多個嗜菌體，其特征在于，所述多個嗜菌體含有嗜菌體展示文庫。

13.如權利要求1所述的嗜菌體，其特征在于，所述嗜菌體經純化或分離。

14.一種產生翻譯后修飾嗜菌體的方法，所述方法包括：

(a)提供含有多肽的嗜菌體，所述多肽含有至少一種芳基-疊氮化物非天然氨基酸殘基；和

(b)使所述嗜菌體在其中所述非天然氨基酸殘基經歷共價修飾的條件下反應，其中所述條件包括施陶丁格連接反應，從而產生翻譯后修飾的嗜菌體。

15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，通過所述方法產生的所述翻譯后修飾嗜菌體是存活的。

16.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述至少一個芳基-疊氮化物非天然氨基酸殘基是對-疊氮基-L-苯丙氨酸殘基。

17.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述提供步驟包括：

(i)提供包含以下組分的真細菌宿主細胞：

(A)編碼所述噬菌體的核酸分子，所述核酸分子包含編碼所述多肽的多核苷酸亞序列，所述多核苷酸亞序列包含至少一個選擇者密碼子；

(B)編碼在所述宿主細胞中正交的氨酰-tRNA合成酶(O-RS)的核酸分子；

(C)編碼在所述宿主細胞中正交的tRNA(O-tRNA)的核酸分子，其中所述O-RS在所述宿主細胞中用所述非天然氨基酸優先氨酰化所述O-tRNA，其中所述O-tRNA識別所述選擇者密碼子；和

D)芳基-疊氮化物非天然氨基酸；和

(ii)培養所述宿主細胞，從而產生所述多核苷酸亞序列編碼的多肽，其中所述芳基-疊氮化物非天然氨基酸在翻譯期間對選擇者密碼子起反應而摻入所述多肽，從而產生包含由所述多核苷酸亞序列編碼的多肽的噬菌體，其中所述芳基-疊氮化物非天然氨基酸摻入所述多肽。

18.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步驟包括提供大腸桿菌宿主細胞。

19.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步驟包括提供包含編碼O-RS的核酸分子的真細菌宿主細胞，其中所述O-RS衍生自詹氏甲烷球菌氨酰-tRNA合成酶。

20.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步驟包括提供包含編碼O-RS的核酸分子的真細菌宿主細胞，其中所述O-RS衍生自詹氏甲烷球菌酪氨酰-tRNA合成酶。

21.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步驟包括提供包含編碼O-tRNA的核酸分子的真細菌宿主細胞，其中所述O-tRNA是琥珀抑制型tRNA。