[發明專利]用于培養細胞的系統和方法

無效

• 申請號: 200680011672.6
• 申請日: 2006-04-10
• 公開（公告）號: CN101155909A
• 公開（公告）日: 2008-04-02
• 發明（設計）人: L·桑德;A·孫德伯格
• 申請（專利權）人: 阿斯利康（瑞典）有限公司
• 主分類號: C12M3/04
• 分類號: C12M3/04;C12M1/18
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 原紹輝

技術領域

本發明涉及將物質引入到多層細胞工廠內的方法。本發明也涉及包括多層細胞工廠的細胞培養系統。

背景技術

多層細胞工廠廣泛地用作試驗室細胞工作的部分。細胞工廠可從不同的供貨商處獲得，例如Nunc?A/S，Roskilde，Denmark和CorningIncorporated?Life?Sciences，Acton，MA?01720，USA。可以獲得不同尺寸的帶有不同層數的適合于不同用途的細胞工廠(cellfactory)。例如，這些細胞工廠的10疊(十層)形式被發現是特別地有用的，因為可以以相對地少的額外工作、設備或空間來產生大量的細胞。然而，當前用于填充這些細胞工廠的標準方法具有一些問題，這導致了高的時間和勞動成本和/或導致不滿意的填充和收獲，這意味著比其他方式可能的低的細胞產量。

即使當前的標準方法可以被改進以用于具有不同層數的細胞工廠，但現在為簡化起見僅將描述用于十層細胞工廠的基本的接種和收獲過程。所給出的數字應看作合適的例子。

為將細胞接種到十層細胞工廠內，將1500ml的使用合適的介質的具有希望的每毫升細胞濃度的細胞懸浮液引入到細胞工廠內。細胞應處于完全均質的懸浮液內且大致同時均勻地進入到所有層內，以避免在不同層內的不同細胞個數。

待接種到細胞工廠內的細胞最初在組織培養燒瓶內生長。當細胞從組織培養燒瓶中被收獲時，它們懸浮在合適的介質中。細胞和介質(細胞懸浮液)被轉移到小瓶內。對于十層細胞工廠，一般地從組織培養燒瓶準備三瓶每瓶500ml的細胞懸浮液。三個瓶將每個大體上包含相同的細胞個數。細胞懸浮液從三個瓶轉移到中間容器中，在中間容器中保持細胞懸浮液直至為接種細胞而將其引入到細胞工廠。根據一個現有技術方法，中間容器可以具有大瓶形式或根據另一個現有技術方法，具有移液管形式，這將在以下更詳細描述。

為收獲細胞，首先將介質從細胞工廠去除而細胞保持接附到每層的底片。然后，將200至500ml的例如磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)的沖洗物質引入到細胞工廠以從細胞沖洗殘余的介質。然后去除沖洗物質且將100至150ml的例如Accutase^TM或Trypsin的解離酶引入到細胞工廠的層且將細胞工廠在37℃下溫育數分鐘。當細胞已分離時，將200至400ml的介質引入到細胞工廠內以停止酶的作用。此停止酶反應的功能是以上所述使用沖洗物質從細胞沖洗殘余介質的一個原因。如果不使用沖洗物質，則解離酶將不有效地工作。

存在兩個目前用于接種和收獲10疊細胞工廠的現有技術方法。第一個方法在附圖的圖1中圖示。根據此第一方法，大瓶2包含待引入到多層(例如10層)細胞工廠4內的所有細胞懸浮液。細胞懸浮液經由連接到大瓶2的底部部分的管道6被引入到細胞工廠4內。夾7控制了細胞懸浮液的流動。為具有通過管道6的細胞懸浮液的有效流動，大瓶2放置在大塊8上，使得當夾打開時，重力將導致細胞懸浮液從大瓶流到細胞工廠4。細胞工廠4的十層10a至10j通過通道相互連接。此現有技術方法的優點是細胞工廠4可以放置為使得層10a至10j垂直地站立，如在圖1中示出。這使得層10a至10j大體上同時被填充，因為相互連接的通道將迅速地將細胞懸浮液從一個垂直站立的層擴展到下一個垂直站立的鄰近的層。然而，此方法存在一些缺點。細胞必須小心處理，所以為無菌性原因，當以細胞懸浮液填充大瓶2時，它必須保持在層流空氣流(LAF)臺內。也因為大且重的瓶2需要塊8來保持包含細胞懸浮液的大瓶，所以大瓶2相對于細胞工廠4的高度不可調整。因此，一方面大瓶2必須提升足夠高，使其底部部分位于借助于重力填充細胞工廠4的滿意的高度水平，且另一方面大瓶2的位置越高，則對于操作者瓶的填充越不便，操作者將不得不努力使其臂在LAF臺的罩下方以能將細胞懸浮液引入到大瓶2內。即使在將大瓶2放置在塊8上前填充大瓶2也是非常困難的，且對于操作者是勞累的。此外，大塊8和瓶2因其龐大性可能危及LAF臺內的空氣流動。旋轉大瓶2內的細胞懸浮液以獲得均質性也是非常困難的。此方法的另一個缺點是，它要求將整個大瓶連同接附的管道6一起高壓滅菌。此方法的再另一個缺點是不容易允許隨后添加沖洗物質或酶。