[發明專利]由無活性初始材料制備生物活性糖蛋白

無效

• 申請號: 200680007902.1
• 申請日: 2006-03-09
• 公開（公告）號: CN101137396A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: R·弗蘭克;H·康拉特;E·格拉本霍斯特;N·燦德爾
• 申請（專利權）人: 弗雷澤紐斯卡比德國有限公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61P7/00;A61P7/02;A61P7/04;A61P7/06;A61P9/00;A61P9/10;A61P35/00;A61P35/02;A61P31/12
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所
• 代理人: 陳文平

1.一種制備包含糖蛋白和聚合物或所述聚合物的衍生物的偶聯物的方法，其中該聚合物是羥烷基淀粉(HAS)，該方法包括以下步驟：

a)在能夠催化在該糖蛋白和如下修飾的多元醇之間形成共價鍵的轉移酶存在下，使所述糖蛋白與帶有通過共價鍵與之連接的官能團Z的修飾的多元醇反應，產生與多元醇共價連接的糖蛋白，后者帶有通過共價鍵與之連接的至少一個官能團Z，和

b)使聚合物或其衍生物的至少一個官能團A與在步驟a)中添加到所述糖蛋白上的糖蛋白的至少一個官能團Z反應，由此形成共價鍵，

所述步驟b)優選地如下進行：

使聚合物或其衍生物的至少一個官能團A與在步驟a)中添加到所述糖蛋白上的糖蛋白的至少一個官能團Z反應，由此形成共價鍵，其中Z選自氨基、硫醇基、醛基、半縮醛基、酮基、馬來酰亞胺基和硫酯基，

-其中，若Z為醛基或酮基時，A包含與Z形成所述鍵的氨基，

-其中，若Z為氨基時，A選自反應性羧基和醛基、酮基或半縮醛基，

-其中，若Z為馬來酰亞胺基時，A包含與Z形成所述鍵的硫醇基，

--其中，若A為醛基、酮基或半縮醛基時，該方法還包括通過以下方式向聚合物中引入A，以形成聚合物衍生物：

---使聚合物與一種至少雙官能化合物反應，其中一個官能團可與聚合物反應，至少另一個官能團為醛基、酮基或半縮醛基，或者是經進一步化學修飾后產生醛基、酮基或半縮醛基的官能團，或

---氧化該聚合物，產生至少一個、特別是至少兩個醛基，或

--其中，若A為反應性羧基時，該方法還包括通過以下方式向聚合物中引入A，以形成聚合物衍生物：

---選擇性氧化聚合物的還原性末端，并活化所得的羧基，或

---使聚合物的未氧化的還原端與碳酸二酯反應，或

-其中，若Z為硫醇基時，A包含與Z形成所述鍵的

--馬來酰亞胺基，或

--鹵乙酰基。

2.如權利要求1所述的方法，其中在步驟a)中，至少50％、更優選至少75％的初始糖蛋白被轉化為與多元醇共價連接的糖蛋白，該多元醇帶有通過共價鍵與之連接的至少一個官能團Z。

3.如權利要求1所述的方法，其中在步驟a)中修飾的多元醇是修飾的糖核苷酸，特別是修飾的巖藻糖-、葡萄糖-、甘露糖-、N-乙酰葡糖胺-、N-乙酰半乳糖胺-、唾液酸核苷酸或半乳糖-核苷酸，特別是CMP-NeuAc、GDP-Man、UDP-GlcNAc、UDP-GalNAc、UDP-Glc、或GDP-Fuc。

4.如權利要求1-3中任意一項所述的方法，其中所述官能團Z選自酰肼基、羥胺、硫醇基、醛基、半縮醛基、酮基、馬來酰亞胺基和硫酯基。

5.權利要求4的方法，其中所述官能團Z與糖核苷酸的C-6羥基通過連接分子連接，該連接分子例如是任選取代的直鏈、支鏈和/或環狀烴殘基。

6.如上述權利要求中任意一項所述的方法，其中所述轉移酶是EC?2.4.1類別的糖基轉移酶，特別是其中該轉移酶選自β1-4半乳糖基轉移酶，β1-3半乳糖基轉移酶、α1-3半乳糖基轉移酶、GlcNAc-轉移酶、甘露糖基轉移酶、葡萄糖基轉移酶、巖藻糖基轉移酶和唾液酸轉移酶。

7.如上述權利要求中任意一項所述的方法，其中所述糖蛋白選自促紅細胞生成素(EPO)、IFNβ、GM-CSF、APC、tPA、A1AT、ATIII、HCG、LH、FSH、抗體融合蛋白、治療性抗體、白介素特別是白介素2或6、IFN-α、CSF、因子VII、因子VIII和因子IX。

8.如上述權利要求中任意一項所述的方法，其中在步驟b)中，在步驟a)后獲得的修飾的糖蛋白有至少50％、更優選至少75％被轉化為含有糖蛋白和聚合物或所述聚合物的衍生物的偶聯物。

9.如上述權利要求中任意一項所述的方法，其中所述羥烷基淀粉是羥乙基淀粉。

10.如權利要求9所述的方法，其中羥乙基淀粉的分子量為2至200kD，優選4至130kD，更優選4至90kD。