[發(fā)明專利]一種用于促進(jìn)分枝桿菌生長(zhǎng)的結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610171552.4
• 申請(qǐng)日: 2006-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101210045A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳雪瓊;陽(yáng)幼榮;李洪敏;韓躍松;李邦印;張俊仙;梁艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第三○九醫(yī)院
• 主分類號(hào): C07K14/35
• 分類號(hào): C07K14/35;C12N15/09;C12N15/31;C12N1/21
• 代理公司: 北京北新智誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 耿小強(qiáng)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬醫(yī)學(xué)細(xì)菌學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于促進(jìn)分枝桿菌生長(zhǎng)的結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

在全世界結(jié)核病依然是危害人類健康的主要傳染病之一，1985年以來(lái)艾滋病的流行、結(jié)核感染的移民和部分人群生活貧困等原因使美國(guó)等歐美發(fā)達(dá)國(guó)家結(jié)核病發(fā)病率呈回升趨勢(shì)，尤其是結(jié)核菌耐藥問(wèn)題和非結(jié)核分枝桿菌病的發(fā)病率逐年上升使結(jié)核病治療更是雪上加霜。目前全世界有結(jié)核病人約2000萬(wàn)，每年新增結(jié)核病人800～1000萬(wàn)，每年死亡人數(shù)約300萬(wàn)。

我國(guó)的結(jié)核病疫情和耐藥情況都相當(dāng)嚴(yán)重，非結(jié)核分枝桿菌(簡(jiǎn)稱NTM)病也不容忽視。中國(guó)是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，結(jié)核病人數(shù)位居世界第二，僅次于印度。2000年第四次全國(guó)結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查初步結(jié)果表明，中國(guó)有5.5億人感染了結(jié)核菌；現(xiàn)有肺結(jié)核病人451萬(wàn)，其中傳染性肺結(jié)核病人196萬(wàn)；每年死亡人數(shù)約13萬(wàn)。因此，結(jié)核病的早期診斷、鑒別診斷對(duì)結(jié)核病的早期、有效化療和控制結(jié)核菌傳播都有極其重要的意義。

早期診斷、發(fā)現(xiàn)病人、選擇敏感的抗結(jié)核藥物進(jìn)行有效治療是控制結(jié)核病的關(guān)鍵。傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)檢查是發(fā)現(xiàn)傳染源的主要途徑和手段，是結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是確定結(jié)核病化療方案的重要依據(jù)，也是考核療效、評(píng)價(jià)防治效果的可靠標(biāo)準(zhǔn)，是國(guó)家結(jié)核病控制規(guī)劃(NTP)的重要組成部分，在結(jié)核病防治工作中起著不可缺少的重要作用。其中，臨床標(biāo)本涂片、抗酸染色、鏡檢雖簡(jiǎn)便、快速，但檢測(cè)的靈敏度低，需10⁴～10⁵個(gè)菌/ml痰才能檢出，陽(yáng)性率只有20-30％；傳統(tǒng)的分枝桿菌羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性率低(只有30％左右)，而且需4-8周時(shí)間；傳統(tǒng)的藥敏試驗(yàn)需1～2月時(shí)間，不能滿足臨床早期、有效化療的需要，使耐藥尤其是多耐藥結(jié)核病人采用目前標(biāo)準(zhǔn)的化療方案治療無(wú)效，耐藥菌播散。顯然傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)檢查方法不能滿足結(jié)核病預(yù)防、控制的需要。

迄今報(bào)道的新的分枝桿菌培養(yǎng)基主要有兩大類：液體培養(yǎng)基以Middlebrook7H9和蘇通液體培養(yǎng)基應(yīng)用較多；固體培養(yǎng)基以雞卵液為主要組分的培養(yǎng)基(如酸性羅氏培養(yǎng)基、小川雞蛋培養(yǎng)基)和瓊脂培養(yǎng)基(如匡氏培養(yǎng)基、Middlebrook7H10、7H11瓊脂培養(yǎng)基)應(yīng)用較多。這些新的培養(yǎng)基培養(yǎng)的陽(yáng)性率明顯高于改良羅氏培養(yǎng)基，而且陽(yáng)性報(bào)告時(shí)間明顯縮短，但仍需2周左右的時(shí)間。美國(guó)BectonDickinson公司研制的Bactec?960快速分枝桿菌全自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)和梅里埃公司研制的BacT/Alert?3D快速分枝桿菌全自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)，可將分枝桿菌培養(yǎng)的陽(yáng)性率提高到50-60％，報(bào)告時(shí)間為1-42天；可進(jìn)行4種一線抗結(jié)核藥物的藥敏試驗(yàn)；簡(jiǎn)便、快速，無(wú)放射性污染，在國(guó)內(nèi)外已成為結(jié)核病診斷的標(biāo)準(zhǔn)參照系統(tǒng)之一。但只能做4種藥物的藥敏試驗(yàn)和初步菌種鑒定，儀器價(jià)格昂貴，需專門進(jìn)口專利液體培養(yǎng)基，費(fèi)用較高，在我國(guó)欠發(fā)達(dá)地區(qū)推廣困難。因此，需進(jìn)一步研究新型的分枝桿菌培養(yǎng)基，以縮短培養(yǎng)時(shí)間，提高陽(yáng)性檢出率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是為克服已有分枝桿菌培養(yǎng)基的不足之處，提供一種分枝桿菌生長(zhǎng)促進(jìn)劑，可用于分枝桿菌培養(yǎng)試驗(yàn)，促進(jìn)分枝桿菌的生長(zhǎng)、代謝，縮短培養(yǎng)時(shí)間，提高陽(yáng)性檢出率。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到的：

一種用于促進(jìn)分枝桿菌生長(zhǎng)的結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白。

一種優(yōu)選技術(shù)方案，其特征在于：所述的用于促進(jìn)分枝桿菌生長(zhǎng)的結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白的氨基酸序列如下：

MLRLVVGALLLVLAFAGGYAVAACKTVTLTVDGTAMRVTTMKSR

VIDIVEENGFSVDDRDDLYPAAGVQVHDADTIVLRRSRPLQISLDGHDAKQVWTTASTVDEA

LAQLAMTDTAPAAASRASRVPLSGMALPVVSAKTVQLNDGGLVRTVHLPAPNVAGLLSAAG

VPLLQSDHVVPAATAPIVEGMQIQVTRNRIKKVTERLPLPPNARRVEDPEMNMSREVVEDPG

VPGTQDVTFAVAEVNGVETGRLPVANVVVTPAHEAVVRVGTKPGTEVPPVIDGSIWDAIAGC

EAGGNWAINTGNGYYGGVQFDQGTWEANGGLRYAPRADLATREQIAVAEVTRLRQGWGA

WPVCAARAG。

本發(fā)明的另一目的是提供上述用于促進(jìn)分枝桿菌生長(zhǎng)的結(jié)核分枝桿菌Rv1009蛋白的制備，其步驟如下：