[發(fā)明專(zhuān)利]一種從烏骨雞中提取黑色素的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610169801.6
• 申請(qǐng)日: 2006-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101157804A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊寧;陳思睿;蔣斌;鄭江霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C09B61/00
• 分類(lèi)號(hào): C09B61/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 張慶敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及黑色素的提取方法，具體的說(shuō)，涉及一種從烏骨雞中提取黑色素的方法。

背景技術(shù)

烏骨雞是我國(guó)特有的珍禽，具有特殊的滋補(bǔ)和藥用價(jià)值。在《本草綱目》里，李時(shí)珍說(shuō)“烏骨雞，有白毛烏骨者、黑毛烏骨者、斑毛烏骨者，有骨肉皆烏者、肉白烏骨者，但觀雞舌黑者，則骨肉俱烏，入藥更良”。可見(jiàn)古代醫(yī)學(xué)在辨別烏骨雞的藥用效果時(shí)，是以其肉、骨中的黑色素多少為重要標(biāo)準(zhǔn)的。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)也認(rèn)為烏骨雞的藥用價(jià)值在于其體內(nèi)的黑色素物質(zhì)。黑色素是一種復(fù)雜不規(guī)律的多聚體，廣泛存在于許多生物體和組織中。動(dòng)物性來(lái)源的黑色素是在黑色素體中合成的，而黑色素體是由分布在皮膚或其它組織中的黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的。黑色素細(xì)胞產(chǎn)生兩種截然不同的黑色素類(lèi)型，一種是棕黑色的真黑素，一種是紅褐色的棕黑素。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)證明黑色素能通過(guò)許多種不同的方式來(lái)有效的保護(hù)生物有機(jī)體，例如黑色素對(duì)紫外線的吸收、對(duì)重金屬離子的鰲合作用、清除自由基以及抗氧化功能等等。由于其特殊性質(zhì)，黑色素已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥理學(xué)、化妝品以及其它的領(lǐng)域。

根據(jù)黑色素來(lái)源的不同，獲得黑色素的方法也不盡相同，例如使用化學(xué)合成的方法、酸液提取的方法、堿液提取的方法以及微生物合成的方法等等。然而到目前為止沒(méi)有一個(gè)公認(rèn)的提取純化黑色素的標(biāo)準(zhǔn)方法。隨著對(duì)烏骨雞黑色素的醫(yī)學(xué)以及藥理學(xué)等方面研究的深入，迫切需要建立快速、廉價(jià)、保真的提取方法，從烏骨雞中高效率地提取黑色素。

到目前為止，提取烏骨雞中黑色素的方法主要有兩種：1)劉望夷在1979年使用鹽酸降解蛋白質(zhì)的方法分離烏骨雞黑色素。主要的過(guò)程是：先將烏骨雞的樣本切成碎塊，用濃鹽酸浸泡，重復(fù)多次，所得濾渣用6M鹽酸回流加熱，時(shí)間為300小時(shí)左右，收集沉淀，用蒸餾水和丙酮洗滌干燥。缺點(diǎn)是熱鹽酸回流的時(shí)間太長(zhǎng)，容易破壞和改變黑色素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和微觀形態(tài)；2)蔡華珍等人在2005年使用的酶法水解蛋白質(zhì)分離烏骨雞黑色素。主要過(guò)程是：先將烏骨雞樣本絞碎，然后用酸性蛋白酶作為水解酶，加酶量3.8％，控制pH＝2.8、酶解溫度34.8℃，時(shí)間約為20小時(shí)，收集沉淀，用醚、蒸餾水反復(fù)洗滌，干燥得黑色素。優(yōu)點(diǎn)是基本不會(huì)破壞黑色素的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，提取黑色素的損失小。缺點(diǎn)是成本高，酶解條件復(fù)雜，步驟繁瑣，提取黑色素的時(shí)間長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服已有烏骨雞中提取黑色素技術(shù)的缺陷，從而提供一種步驟簡(jiǎn)單、快速、高保真、低成本的黑色素提取方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種從烏骨雞中提取黑色素的方法，包括將烏骨雞切碎后用鹽酸溶液清洗，浸入液氮0.5～5分鐘后提取。

烏骨雞切碎后優(yōu)選用1～10M的鹽酸溶液清洗5～30分鐘。

浸入液氮后的提取優(yōu)選為將浸入液氮后的烏骨雞粉碎成60～100目粉末，轉(zhuǎn)入索氏提取器中，用1～10M的鹽酸溶液熱回流1.5～3小時(shí)，即可停止，浸提液冷卻至0～5℃析出沉淀，沉淀中先加入與浸提液等體積的丙酮脫脂洗滌3～4遍，然后加入與浸提液等體積的蒸餾水洗滌3～4遍，干燥即得。

其中在進(jìn)行索氏提取時(shí)，所用的鹽酸溶液量沒(méi)有嚴(yán)格規(guī)定，能滿足回流條件既可。加入的丙酮和蒸餾水的量與加入的鹽酸溶液量相同。

本發(fā)明所述的從烏骨雞中提取黑色素的方法與現(xiàn)有的技術(shù)相比，其優(yōu)點(diǎn)是：通過(guò)液氮冷凍后粉碎的方法，在不改變黑色素物理化學(xué)性質(zhì)的前提下，能充分有效的破壞組織中黑色素細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，有利于黑色素的快速釋放，減短了提取黑色素所用的時(shí)間。具體來(lái)說(shuō)，相比于劉望夷的鹽酸降解蛋白質(zhì)法，熱鹽酸回流的時(shí)間從原有的300小時(shí)縮減為1.5-3小時(shí)，也減少了鹽酸對(duì)黑色素結(jié)構(gòu)的破壞作用，保持了烏骨雞黑色素近乎完整的形態(tài)結(jié)構(gòu)。相比于蛋白酶法，優(yōu)點(diǎn)是降低了成本、減短了提取所需的時(shí)間、操作比較簡(jiǎn)單。

附圖說(shuō)明

圖1液氮粉碎、勻漿組織冰凍切片比對(duì)觀察黑色素顆粒釋放的效果圖。

圖2純化后的烏骨雞黑色素的EPR波譜。

圖3純化后的烏骨雞黑色素SEM/TEM圖像。

圖1中，A為液氮粉碎后冰凍切片；B為組織勻漿后冰凍切片。

圖3中，A為100um尺度上純化后烏骨雞黑色素的SEM圖像；B為1um尺度上純化后烏骨雞黑色素的SEM圖像，圖中的顆粒狀物體就是黑色素顆粒；C為200nm尺度上觀察的純化后的烏骨雞黑色素的TEM圖像，圖中的細(xì)微粒是氨基酸。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1：