[發明專利]一種檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙及其制備方法

無效

• 申請號: 200610167771.5
• 申請日: 2006-12-21
• 公開（公告）號: CN101206224A
• 公開（公告）日: 2008-06-25
• 發明（設計）人: 王景林;王俊虹;康琳;高姍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: G01N33/549
• 分類號: G01N33/549;G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙，包括吸水紙墊、緊密連接于所述吸水紙墊的包被有抗蓖麻毒素A鏈蛋白抗體的纖維膜、緊密連接于所述纖維膜上的含有抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體的免疫金膠體探針的金標墊和緊密連接于所述金標墊的樣品墊。

2.根據權利要求1所述的檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙，其特征在于：所述吸水紙墊的下面還緊密連接有背板。

3.根據權利要求1所述的檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙，其中抗蓖麻毒素A鏈蛋白抗體按如下方法制備：選取一株抗蓖麻毒素A鏈蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株免疫雌性Balb/C小鼠，一周后取腹水；將該抗體溶液噴到纖維膜上，室溫晾干，然后將其粘貼在吸水紙墊上。

4.根據權利要求1所述的檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙，其中抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體按如下方法制備：肌肉注射重組蓖麻毒素B鏈蛋白0.2mg+等體積福氏完全佐劑，一周后1mg蛋白+等體積福氏不完全佐劑加強免疫，4周后加強免疫蛋白1mg，3天后抽血。

5.根據權利要求1所述的檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙，其中抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體的免疫金膠體探針按如下過程制備：

1)將0.01％HAuCl₄水溶液，加熱煮沸，每100ml?HAuCl₄溶液進行如下操作：

攪動下加入1.5ml的1％檸檬酸三鈉水溶液，直到液體顏色穩定成葡萄酒紅色，得到膠體金溶液；

2)確定最低偶聯抗體濃度：調節膠體金溶液pH?9.0，將抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體稀釋2mg/mL，并依次加入到1ml膠體金溶液中100μl、90μl、80μl、70μl、60μl、50μl、40μl、30μl、20μl、10μl、0μl，混勻后于室溫下放置5min，加入10％NaCl水溶液0.1ml，混勻，靜置，10-20min后觀察液體顏色，膠體金溶液顏色不變時所含最少抗體量，為穩定1ml膠體金溶液所需最低偶聯抗體量；

3)將終濃度為0.08mg/mL上述最低偶聯抗體量的抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體加入到50ml膠體金溶液中，混勻后得到抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體的免疫膠體金探針溶液。

6.根據權利要求1或2所述的檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙，其特征在于：所述纖維膜為硝酸纖維膜、醋酸纖維膜；所述金標墊的材料為玻璃纖維膜、樹脂；所述樣品墊為玻璃纖維膜。

7.一種制備檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙的方法，包括以下步驟：

1)制備抗蓖麻毒素A鏈蛋白抗體，然后將上述抗體噴于纖維膜上，將該纖維膜粘貼在吸水紙墊上；

2)制備抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體；

3)制備含抗蓖麻毒素B鏈蛋白抗體的免疫膠體金探針；

4)將玻璃纖維膜或樹脂浸泡到上述制備的免疫膠體金探針溶液，得到金標墊；干燥后粘貼在步驟1)得到的噴有抗蓖麻毒素A鏈蛋白抗體的纖維膜上；

5)在上述得到的金標墊上面再粘貼樣品墊，得到檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙。

8.根據權利要求7所述的制備檢測蓖麻毒素的免疫層析試紙的方法，其特征在于：所述吸水紙墊的下面還粘貼有背板。