[發明專利]用磁珠支持基質及質譜判斷正常人與肝癌的試劑盒和方法

無效

• 申請號: 200610140288.8
• 申請日: 2006-10-23
• 公開（公告）號: CN101169417A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 許洋
• 申請（專利權）人: 許洋
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N30/02;G01N30/86;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種新的肝癌生物樣品中蛋白質分析方法的試劑盒。一種通過能與蛋白質結合的基質去捕獲生物標志，并用有定量控制的質譜分析來檢測肝癌生物標志。在此提及的此項發明涉及蛋白質檢測領域，為一種新的非侵入性的體外質譜檢測方法。本發明可以應用到已經脫離人體的體液中的肝癌生物標志組合的檢測方法或試劑盒。

背景技術

隨著人類基因組計劃的實施和完成，科學家們提出了后基因組(post-genome)計劃的概念，研究要點轉移到功能基因組學上，而生物功能主要體現物質是蛋白質。1994年，澳大利亞Macquarie大學的Wilkins和Williams首先提出蛋白質組(proteome)的概念，指的是“一種基因組所表達的全部蛋白質”，即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。對于蛋白質組的研究是功能基因組學研究的核心，稱為蛋白質組學(proteomics)。蛋白質組學被認為是后基因組研究中最主要的部分。與基因組相比，蛋白質組的組成更復雜，功能更活躍，應用前景更廣泛。蛋白質組學從細胞整體水平進行蛋白質屬性的研究，如表達水平、翻譯后修飾及相互作用等，并由此獲得對于疾病過程、細胞生理生化特征和調控網絡的廣泛完整的認識。所以，蛋白質組學技術正在逐步成為生物學、醫學及制藥學等的重要研究手段。

不論是細胞的正常功能還是病理特性都在一定程度上取決于細胞所表達的蛋白質功能。因此，鑒定人體內表達的蛋白質的區別，可用于體外疾病樣本診斷及篩查，并最終用于藥物開發和疾病治療。而要進行蛋白質表達和功能的差異化分析，要求能夠達到分辨細胞內分子的復雜混合物的程度。但細胞內許多物質往往以微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用這些常規手段難以進行化學結構及蛋白質序列鑒定分析。用質譜聯合可克服這一技術缺點。

血液，由于易采集性和對機體的生理狀況的易記錄性，成為研究生物標記物的最好的來源之一。蛋白指紋圖譜(質譜)技術(MALDI-TOF-MS、SELDI-TOF-MS)是近幾年發展起來的實驗室診斷新技術，它且具有操作較簡便、多樣本檢測、檢測快速、靈敏性和特異性高等優點，是實驗室診斷技術革命性的進展。蛋白指紋圖譜技術在醫學領域的應用，主要用于多種疾病，特別是腫瘤的早期診斷。蛋白指紋圖譜技術是一項發展前景非常好的診斷技術，具有廣闊的臨床應用前景。使用蛋白指紋圖譜技術已經成為研究比較蛋白質組學和發現生物標記物可選用的方法，尤其在多肽及低分子量蛋白質質譜分析的研究中非常有用。但是，我們在進行蛋白質質譜分析時發現沒有一個臨床肝癌質譜診斷標準化的試劑盒。

國家高技術研究發展計劃(863計劃)在2006年已將人類重要生物標志物圖譜的實驗確證和分析技術研究列為國家目標導向類專題課題。研究血清(漿)樣品分離、肝癌多肽圖譜快速掃描和肝癌特征峰等系列用于肝癌血清標志物圖譜發現的質譜診斷關鍵技術，創建具有自主知識產權的健康人群和3-4種我國常見惡性腫瘤人群“血清質譜多肽圖譜”的任務即將拉開戰幕。

發明內容：

本發明的目的是建立一種在肝癌生物樣品中檢測的方法。該方法為肝癌的早期檢測提供了新的途徑，并為進一步發現新的肝癌生物標志提供了基礎。

本發明涉及一種通過生物標志結合的基質表面，并用定量性質譜分析來同時檢測多種生物標志狀態。

本發明中的生物標志是利用一臺質譜儀來發現的。該設備的質量精確度約為+/-0.1％。

基質是任何能與生物標志選擇性或特異性結合的物質。舉例說明，WCX陰離子，C8/C18疏水作用基質吸附劑，分離生物化學中的這些方法和由這些方法產生的吸附劑具有診斷反面的用途(即陰離子吸附劑捕獲陽離子蛋白質)。底基洗去未吸附的物質。任何適宜的洗液均可使用。

生物標志首先能夠被具有能與生物標志物結合基質吸附表面捕獲，非吸附物能從基質上洗脫，吸附到底基的生物標志物在質譜儀中被檢測。生物標志通過離子發生源，如激光，被離子化，產生的離子被一個離子感受集合器收集，然后質量分析器分析那些通過的離子。之后，檢測器將檢測的離子信息轉換為質荷比。定量性控制及質譜激光能量調控：每次測試前，用質譜的標準化質控血清，將標準化質控血清中用于定量的標準峰6634.0Da強度調至50％質譜信號強度的最大值。生物標志的檢測明顯地將與信號強度的檢測有關。這樣，生物標志的數量與質量都可以被檢測出來。