[發明專利]利用金磁微粒進行細胞分選的方法

有效

• 申請號: 200610104760.2
• 申請日: 2006-10-19
• 公開（公告）號: CN101165173A
• 公開（公告）日: 2008-04-23
• 發明（設計）人: 崔亞麗;陳超;劉蓓;高婧
• 申請（專利權）人: 陜西西大北美基因股份有限公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司
• 代理人: 商宇科

1.一種金磁微粒用于細胞分選的方法，其特征在于：所述方法包括以下步驟：

1)抗體分子固定化：在金磁微粒表面固定單克隆抗體分子；

2)細胞和金磁微粒的結合：將固定好單克隆抗體分子的金磁微粒和待分離樣本孵育15-60min，使細胞表面抗原和單克隆抗體充分結合而使細胞結合在金磁微粒表面；

3)磁分離：孵育完畢之后，使用磁性分離裝置進行磁分離，將目的細胞和其它細胞分開；

4)清洗：磁分離結束后對金磁微粒進行清洗洗去非特異性結合的細胞。

2.根據權利要求1所述的金磁微粒用于細胞分選的方法，其特征在于：所述步驟1)中的固定的具體步驟如下：

1.1)金磁微粒預處理：取金磁微粒，置于離心管中，加入偶聯緩沖液用手搖勻，磁性分離1-3min，棄上清；

1.2)抗體溶液的配制：將單克隆抗體溶解于偶聯緩沖液中，然后加入到含有預處理過的金磁微粒的離心管中；

1.3)固定化反應：將離心管中的金磁微粒和單克隆抗體搖勻，在20-40℃的條件下，充分反應5-30min，完成單克隆分子在金磁微粒表面的固定；

1.4)清洗：將離心管置于磁性分離器上，磁性分離1-3min，棄上清，加入清洗緩沖液搖勻，磁性分離1-3min，棄上清，重復此步驟洗去未結合的抗體分子；

1.5)封閉：取封閉劑加入金磁微粒中，搖勻，在20-40℃的條件下充分反應30min-2h，然后用清洗緩沖液清洗去除多余的封閉液。

3.根據權利要求1所述的金磁微粒用于細胞分選的方法，其特征在于：所述步驟1)中的固定的具體步驟如下：

.1.1)金磁微粒預處理：取金磁微粒，置于離心管中，加入偶聯緩沖液搖勻，磁性分離1-3min，棄上清；

1.2)抗體溶液的配制：將二抗分子溶液溶解于的偶聯緩沖液中，然后加入到含有預處理過的金磁微粒的離心管中；；

1.3)固定化反應：將離心管中的金磁微粒和二抗分子搖勻，在20-40℃的條件下、充分反應5-30min，完成二抗分子在金磁微粒表面的固定；

1.4)清洗：將離心管置于磁性分離器上，磁性分離1-3min，棄上清，加入清洗緩沖液搖勻，磁性分離1-3min，棄上清，重復此步驟洗去未結合的二抗分子；

1.5)封閉：取封閉劑加入金磁微粒中搖勻，在20-40℃的條件下、充分反應30min-2h，加清洗緩沖液洗去多余的封閉劑；

1.6)結合單抗分子：取固定好二抗分子且封閉清洗后的金磁微粒和的單克隆抗體分子在2-8℃的條件下孵育15-30min，使單克隆抗體分子和二抗分子充分結合；

1.7)加入清洗緩沖液搖勻，磁性分離1-3min，棄上清，重復此步驟洗去未結合的單抗分子。

4.根據權利要求1所述的金磁微粒用于細胞分選的方法，其特征在于：所述步驟1)中的固定的具體步驟如下：

1.1)金磁微粒的預處理：取金磁微粒，置于離心管中，加入偶聯緩沖液搖勻，磁性分離1-3min，棄上清；

1.2)金磁微粒結合連親和素：將鏈親和素溶于偶聯緩沖液配成鏈親和素溶液，然后加入到含有預處理過的金磁微粒的離心管中，搖勻，充分反應5-30min；

1.3)固定生物素化單抗：將單克隆抗體分子溶于偶聯緩沖液中，加入結合有鏈親和素的金磁微粒，搖勻，在20-40℃的條件下，充分反應5-30min；

1.4)清洗：將離心管置于磁性分離器上，磁性分離1-3min，棄上清，加入清洗緩沖液搖勻，磁性分離1-3min，棄上清，重復此步驟洗去未結合單抗分子；

1.5)封閉：取封閉劑加入金磁微粒中搖勻，在20-40℃的條件下，充分反應30min-2h，加清洗緩沖液洗去多余的封閉劑。