[發明專利]錳診斷/測定試劑盒及錳濃度測定方法

無效

• 申請號: 200610097320.9
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173943A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種錳診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定錳濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

錳作為一種微量元素在人體中是不可或缺的必需成分，同時也是對人體有毒的物質。在自然狀態下，以兩價、三價和四價形式存在，氧化程度越低，毒性越高。通常錳有八種不同的氧化狀態。錳的生物學意義是作為人體中輔助因子有多種多樣的功能。然而，在許多酶反應激活中，Mn²⁺和Mg²⁺可互相替代。

常用石墨爐原子吸收分光光度測定法、原子發射ICP-OES。中子激發分析(NAA)是最好的方法，但僅能在一些條件好的實驗室才能測定。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶聯法(Couple?Reaction)技術，計量通過酶聯反應生成吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneiminedye)所導致在400-700nm波長處吸光度的上升，得以測定錳濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的錳診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行錳濃度測定，而且測定速度快、靈敏度大、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明錳濃度測定方法原理如下：

草酸+氧?草酸氧化酶/Mn²⁺?二氧化碳+過氧化氫

過氧化氫+還原型色原體組合?過氧化物酶?吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水

這個方法應用需要錳離子激活的草酸氧化酶(oxalate?oxidase；EC1.2.3.4)(偶)聯過氧化物酶(peroxidase；EC?1.11.1.7)酶促反應速率比色法。草酸氧化酶氧化草酸反應產生過氧化氫，再通過過氧化物酶的作用，將無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400-700nm(根據還原型色原體組合的不同而定)波長處，測定染料-吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)-含量高低的光吸收大小；通過測量400-700nm(根據還原型色原體組合的不同而定)處吸光度上升的速度，得出錳濃度大小測定結果。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，如下成分關系的本發明錳診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????100mmol/L

穩定劑????????????50mmol/L

過氧化物酶????????30000U/L

草酸氧化酶????????16000U/L

草酸????????????????50mmol/L

還原型色原體組合????0.1——20mmol/L

所述還原型色原體組合(Chromogen)可以是下列28個組合中的任何一個配對組合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-雙乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-雙氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-雙氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

仨溴羥基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

雙甲基苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3-甲基-乙基-羥基苯胺

4-氨基抗砒

石碳酸

4-氨基抗砒