[發明專利]谷氨酸脫氫酶診斷試劑盒及谷氨酸脫氫酶活性濃度測定方法

無效

• 申請號: 200610096890.6
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101169372A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種谷氨酸脫氫酶診斷試劑盒，同時本發明還涉及測定谷氨酸脫氫酶活性濃度的方法，屬于醫學檢驗測定技術領域。

背景技術

谷氨酸脫氫酶是一種主要存在于細胞線粒體基質中的酶，以肝臟含量最高，其次為腎臟、胰腺、腦、小腸粘膜及心臟等器官。據報道，肝臟中的谷氨酸脫氫酶濃度是心肌中的17倍，骨骼肌的80倍，胰腺的28倍。由于谷氨酸脫氫酶的肝臟特異性，外周血中酶活性的改變在一定程度上可反映肝臟功能的變化，故被認為是肝損害的一個敏感指標。目前血清谷氨酸脫氫酶的測定主要采用連續監測法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)技術，連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定谷氨酸脫氫酶活性濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的谷氨酸脫氫酶診斷試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行谷氨酸脫氫酶活性濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明谷氨酸脫氫酶活性濃度測定方法原理如下：

這種方法應用谷氨酸脫氫酶(Glutamate?dehydrogenase；EC?1.4.1.2；EC?1.4.1.3)酶促反應連續監測法。谷氨酸脫氫酶酶解酮戊二酸酯反應，同時將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算谷氨酸脫氫酶的活性濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明谷氨酸脫氫酶診斷試劑較為理想：

緩沖液???????????????????100mmol/L

穩定劑???????????????????50mmol/L

還原型輔酶???????????????0.25mmol/L

氯化氨???????????????????30mmol/L

2-酮戊二酸酯?????????????20mmol/L

本發明的谷氨酸脫氫酶診斷試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、2-酮戊二酸酯、氯化氨。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、2-酮戊二酸酯、氯化氨。

還原型輔酶、2-酮戊二酸酯、氯化氨在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、。

試劑2

緩沖液、2-酮戊二酸酯。

試劑3

緩沖液、氯化氨。

還原型輔酶、2-酮戊二酸酯、氯化氨在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定谷氨酸脫氫酶活性濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的谷氨酸脫氫酶診斷試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液?????????????100mmol/L

穩定劑????????????????????????????????????50mmol/L

還原型輔酶????????????????????????????????0.25mmol/L

氯化氨????????????????????????????????????30mmol/L

2-酮戊二酸酯??????????????????????????????20mmol/L

試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用前，加入純凈水，復溶后使用。