[發明專利]一種豬圓環病毒2型遺傳標記毒株及其應用

有效

• 申請號: 200610086918.8
• 申請日: 2006-06-16
• 公開（公告）號: CN101089177A
• 公開（公告）日: 2007-12-19
• 發明（設計）人: 劉長明;危艷武;張超范;陸月華;孔憲剛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/12;G01N33/53;C12Q1/70
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及一種新毒株，尤其涉及一種豬圓環病毒2型遺傳標記毒株及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

豬圓環病毒2型(Porcine?circovirus?type?2，PCV2)主要引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合癥(Postweaning?multisystemic?wasting?syndrome，PMWS)。本病于1997年在加拿大首次證實，相繼歐、美、亞各洲許多國家均有本病發生的報道。我國豬群也普遍有本病流行，對養豬業構成巨大危害(朗洪武，張廣川，吳發權等.斷奶豬多系統衰竭綜合征血清抗體檢測.中國獸醫科技，2000，30(3)：3—5.)，除PMWS外，豬皮炎與腎炎綜合征、增生性壞死性肺炎、豬呼吸道綜合征、繁殖障礙、先天性顫抖、胎兒心肌炎及腸炎等疾病也證實與PCV2感染有關。PCV2是一種圓形小顆粒病毒，直徑17nm，呈二十面體對稱，無囊膜，基因組由單股負鏈閉環DNA組成，含1767或1768堿基。基因組包括2個大的開放閱讀框架(ORFs)，ORF1基因編碼病毒復制酶(Replicase)，ORF2基因編碼病毒衣殼蛋白(Capsid)。病毒感染的致病性主要與機體免疫系統相互作用有關，可導致全身性淋巴細胞壞死，引起淋巴細胞耗損和巨噬細胞減少，引發機體免疫抑制，增加對各種病原體的易感性。

目前，PCV2感染引起的PMWS及相關疾病給全球養豬業造成巨大損失，病毒感染產生的免疫抑制能夠導致現有疫苗免疫失敗，造成多種病原混感，并使疫病流行更加嚴重。采用疫苗免疫已成為控制PCV2相關疾病的關鍵，是減少經濟損失的有效方法。采用疫苗免疫已成為控制PCV2相關疾病的關鍵，是減少經濟損失的有效方法。由于該病毒在體外培養毒價低，給疫苗的研制造成一定困難。

對于構建PCV2感染性分子克隆，目前主要采取兩種策略：一是將病毒基因組克隆，再進行雙基因組順式連接，在重組質粒上形成一個完整的病毒基因組調控單元，經質粒轉染細胞獲得感染性病毒；另一種是將病毒單基因組克隆到質粒上，經酶切及凝膠電泳回收，進行自我環化形成模擬自然病毒基因組結構，轉染細胞獲取病毒。研究表明，上述兩種方法均能成功獲得感染性病毒。比較而言，前者可操作性強，重復性好；后者因凝膠純化與自我環化等環節不易控制，使感染性分子克隆轉染率不高，可重復性不好。

最近，Fenaux等(fenaux?M，Opriessing?T，Halbur?PG，et?al.Immunogenicity?andpathogenicity?of?chimeric?infectious?DNA?clones?of?pathogenic?porcine?circovirus?type?2(PCV2)and?nonepathogenic?PCV1?in?weanling?pigs[J].J?Virol，2003，77(20)：11232-11243.Fenaux?M，Opriessing?T，Halbur?PG，et?al.A?chimeric?porcine?circovirus(PCV)with?the?immunogenic?PCV?type?2(PCV2)cloned?into?the?genomic?backbone?of?thenonpathogenic?PCV1?induces?protective?immunityagainst?PCV2?infection?in?pigs[J].JVirol，2004，78(12)：6297-6303；Fenaux?M，Opriessnig?T，Halbur?PG，et?al.Two?amino?acidmutations?in?the?capsid?protein?of?type?2?porcine?circovirus(PCV2)enhanced?PCV2replication?in?vitro?and?attenuated?the?virus?in?vivo[J].J?Virol.2004，78(24)：13440-6)報道了利用PCV1與PCV2基因組ORF2編碼衣殼蛋白區替換構建了嵌合型分子克隆，豬體接種試驗證明其致病性減弱，并可誘導機體產生PCV2衣殼蛋白抗體，可產生免疫保護效果，但病毒在體外培養的情況尚未見后續報道。本發明人也曾進行過類似研究，然而構建的嵌合型病毒在體外培養傳代未獲成功，這可能與兩種病毒基因編碼區替換后改變病毒復制酶的功能有關。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種帶有遺傳標記的豬圓環病毒2型新毒株。