[發明專利]一種用于蛋白質N－端肽特異性識別與測序的方法和試劑盒

無效

• 申請號: 200610072596.1
• 申請日: 2006-04-13
• 公開（公告）號: CN101055266A
• 公開（公告）日: 2007-10-17
• 發明（設計）人: 錢小紅;劉新;周春喜;應萬濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N1/28
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1.一種用于蛋白質N端肽段的識別與測序的方法，該方法包括：

(a)用一種或多種胍基化試劑對蛋白的側鏈氨基進行修飾，封閉蛋白所有側鏈氨基；

(b)用一種或多種化學試劑對蛋白質N-端氨基進行修飾；

(c)用一種或多種還原劑打開蛋白質分子中的二硫鍵，破壞其高級結構；

(d)用一種或多種烷基化試劑封閉疏基防止其重新形成二硫鍵；

(e)用一種或多種化學消化或酶消化法對蛋白質進行消化，以產生適于質譜分析的肽段；

(f)用質譜分析技術特異性識別并分析蛋白質N端肽段，產生二級質譜圖；

(g)對質譜數據進行解析，以鑒定蛋白質并得到蛋白質的N端序列信息。

其特征在于所述步驟(b)的修飾方法為：

用穩定同位素標記的酸酐試劑，特異性對蛋白質N-端氨基進行修飾；再用一種或多種含游離氨基的化學試劑，對蛋白質的修飾反應進行終止。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于穩定同位素標記的酸酐試劑選自同位素標記的乙酸酐、丙酸酐或琥珀酸酐。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于穩定同位素標記的酸酐試劑選自d0/d6-乙酸酐。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于含游離氨基的化學試劑選自三羥乙基氨基甲烷或賴氨酸。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(b)的修飾方法為：

用d0/d6-乙酸酐試劑對蛋白質N-端氨基進行修飾；再用三羥乙基氨基甲烷或賴氨酸對蛋白質的修飾反應進行終止。

6.一種用于蛋白質N端肽段識別與測序的試劑盒，其特征在于該試劑盒含有：

(a)用于特異性標記蛋白N-末端氨基的一種或多種同位素標記的酸酐試劑；

(b)對蛋白質的修飾反應進行終止的一種或多種含游離氨基的化學試劑。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于(a)選自同位素標記的乙酸酐、丙酸酐或琥珀酸酐。

8.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于(a)選自d0/d6-乙酸酐試劑。

9.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于(b)選自三羥乙基氨基甲烷或賴氨酸。