[發(fā)明專(zhuān)利]重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子－2凍干粉針劑的生產(chǎn)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610030691.5
• 申請(qǐng)日: 2006-08-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101134020A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃陽(yáng)濱;孫九如;張翊;任軍;蔡駿
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海新生源醫(yī)藥研究有限公司;上海新生源生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K9/19
• 分類(lèi)號(hào): A61K9/19;A61K38/18
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及制劑生產(chǎn)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明提供了一種人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2(KGF-2)凍干粉針劑，以及相應(yīng)的生產(chǎn)方法，包括有關(guān)的輔料篩選和凍干工藝。

背景技術(shù)

1996年，Yamasaki等(Am?J?Physiol?Gastrointest?Liver?Physiol?2000Nov；279(5))從鼠的胚胎中擴(kuò)增到與角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Keratinocyte?GrowthFactor，KGF)具有高度同源的一種嶄新的細(xì)胞因子，稱(chēng)為角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2(KGF-2)，又叫做成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-10(Fibroblast?Growth?Factor-10，F(xiàn)GF-10)。之后，Emoto等(J?Burn?Care?Rehabil?2000?Jan-Feb；21(1Pt?1)：5-9)克隆到人的KGF-2cDNA，其編碼的蛋白由208個(gè)氨基酸組成，N端有39個(gè)氨基酸的疏水信號(hào)肽，成熟蛋白169個(gè)氨基酸(40-208aa)，理論分子量為19.3kDa，對(duì)肝素具有較強(qiáng)的親和作用。

KGF-2能特異性的結(jié)合于靶細(xì)胞表面的酪氨酸激酶受體FGFR2IIIb(KGFR)、FGFR1而觸發(fā)信號(hào)傳導(dǎo)，從而發(fā)揮生理作用。體外活性研究表明，在0.1-5nM(2-100ng/mL)濃度時(shí)對(duì)角質(zhì)上皮細(xì)胞Bal/MK具有顯著的促分裂作用，對(duì)成纖維細(xì)胞NIH3T3無(wú)作用，而在高于5nM的濃度時(shí)對(duì)NIH3T3同樣具有顯著的促進(jìn)分裂和生長(zhǎng)作用。研究表明，KGF-2mRNA的表達(dá)主要是在胚胎的發(fā)育過(guò)程之中，以及在特定的成年組織如肺、前列腺。在胚胎發(fā)育過(guò)程中KGF-2是起始肢芽的形成及促進(jìn)其生長(zhǎng)的關(guān)鍵的細(xì)胞因子。在創(chuàng)口愈合的過(guò)程中KGF-2mRNA高水平表達(dá)，動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，KGF-2在創(chuàng)口愈合中起著重要作用。

Han等(J?Pathol?1999?Aug；188(4)：431-8)利用消炎痛誘導(dǎo)小鼠小腸潰瘍模型研究表明，KGF-2靜脈注射顯著降低急性和慢性腸損傷。其通過(guò)刺激上皮恢復(fù)和保護(hù)性的前列腺素產(chǎn)生來(lái)抑制小腸炎癥；燒傷等需要大面積皮膚移植的病人，面臨嚴(yán)重的代謝問(wèn)題和感染致死的危險(xiǎn)，Smith等(Pharmacol?Exp?Ther?1999Jul；290(1)：464-71)用無(wú)胸腺裸鼠的皮膚移植試驗(yàn)?zāi)Ｐ停疾镵GF-2對(duì)皮膚上皮形成動(dòng)力學(xué)的影響，表明KGF-2對(duì)移植皮膚的愈合具有極為顯著促進(jìn)作用；Xia等(J?Surg?Res?1999?Feb；81(2)：238-42)利用局部缺血損傷的兔耳真皮潰瘍模型，考查KGF-2對(duì)創(chuàng)口愈合以及對(duì)疤痕形成的影響，結(jié)果表明KGF-2顯著促進(jìn)表皮細(xì)胞生長(zhǎng)，提升上皮形成，此外增強(qiáng)肉芽組織的形成(KGF無(wú)此作用)，較之KGF-1、TGF-beta等細(xì)胞因子，KGF-2最為有效且?guī)缀醪灰鹈黠@的疤痕；Miceli等利用硫酸葡聚糖鈉鹽誘導(dǎo)的鼠潰瘍模型，發(fā)現(xiàn)KGF-2幾乎完全恢復(fù)腸道表面的正常的細(xì)胞構(gòu)造，表明了其對(duì)炎性腸病的臨床治療意義。Jimenez等通過(guò)小鼠背部皮膚切割創(chuàng)口模型研究表明，KGF-2對(duì)起始和加速外傷性創(chuàng)口愈合具有重要意義。

目前國(guó)內(nèi)對(duì)KGF-2的開(kāi)發(fā)利用尚未見(jiàn)諸報(bào)道，僅局限于少量的基礎(chǔ)臨床試驗(yàn)研究。而國(guó)外對(duì)其利用則正處于蓬勃發(fā)展之中。美國(guó)FDA已批準(zhǔn)美國(guó)HUMANGEMNOME?SCIENCES，公司(HGS)對(duì)rhKGF-2(Repifermin)進(jìn)行臨床試驗(yàn)II期研究。

Repifermin是HUMAN?GEMNOME?SCIENCES，Inc(HGS)開(kāi)發(fā)的重組KGF-2的商品名，1998年2月開(kāi)始KGF-2用于創(chuàng)口愈合的兩個(gè)I期試驗(yàn)研究，一個(gè)是皮膚表面的局部用藥，另一個(gè)是通過(guò)注射的全身用藥。試驗(yàn)的目的在于評(píng)價(jià)KGF-2的安全性、藥物動(dòng)力學(xué)以及恰當(dāng)?shù)膭┝俊Ｔ囼?yàn)結(jié)果表明，在選定的劑量下，系統(tǒng)應(yīng)用KGF-2是安全的，健康志愿者能夠良好耐受，幾乎無(wú)副作用。

2000年1月起動(dòng)治療癌癥治療(骨髓移植前高劑量化療)相關(guān)的粘膜炎II期臨床試驗(yàn)，早些時(shí)候已開(kāi)始治療靜脈潰瘍的II期臨床試驗(yàn)。目的在于評(píng)價(jià)系統(tǒng)應(yīng)用KGF-2的安全性和效力，2000年9月公布了治療靜脈潰瘍的IIa期臨床試驗(yàn)結(jié)果，試驗(yàn)考察了94名患者，其靜脈潰瘍面積從3-30cm²，持續(xù)了3-36個(gè)月。每周局部用藥治療兩次，直到12周或者創(chuàng)口完全愈合，因?yàn)殪o脈潰瘍可能需要許多個(gè)月才能完全愈合，試驗(yàn)中統(tǒng)計(jì)了部分愈合的病人數(shù)。