[發明專利]一組與人乳腺癌組織高特異性和高親和力的核酸適配子及其制備方法與應用

無效

• 申請號: 200610015738.0
• 申請日: 2006-09-22
• 公開（公告）號: CN101148666A
• 公開（公告）日: 2008-03-26
• 發明（設計）人: 吳淑慶;弓景波
• 申請（專利權）人: 國家納米技術與工程研究院;清華大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07H21/04;C12Q1/68;A61K31/7088;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 國嘉律師事務所
• 代理人: 盧楓

(一)技術領域：

本發明涉及生物技術領域，特別涉及到利用分子生物學技術中的SELEX技術(即系統進化指數富集技術)制備一組與人乳腺癌組織高特異性和高親和力的核酸適配子，以及所述核酸適配子衍生的序列和修飾序列用于乳腺癌的診斷和靶向治療。

(二)背景技術：

乳腺癌是全球女性發病率最高的惡性腫瘤，據權威醫學資料統計，全球每13分鐘就有一人死于乳腺癌，乳腺癌已經成為嚴重威脅女性健康的重要疾病。隨著國民經濟發展和人民生活水平提高，我國乳腺癌的發病率和死亡率亦呈迅猛上升態勢。中國抗癌協會的最新統計數字顯示，中國婦女乳腺癌死亡率正在以每年3％的速度增長，成為城市中死亡率上升最快的癌癥；乳腺癌在我國的發病率趨于年輕化；85％的患者到醫院檢查時已處于乳腺癌的中晚期，早期發現率極低。更加值得注意的是，乳腺癌可通過直接浸潤、淋巴、血液等途徑轉移，其常見的轉移部位依次為肺及胸膜、骨骼、皮膚軟組織、肝、腦，好發血行轉移是乳腺癌突出的生物學特征，這是本病治療失敗的主要原因所在，也是乳腺癌防治上一個非常棘手的難題，造成數百億人民幣的社會負擔。鑒于以上情況，衛生部疾控司在全國范圍內開展“百萬婦女乳腺普查工程”，科學規范的乳腺篩查方案為其主要目的之一，以最終實現對婦女乳腺癌的早期發現、早期診斷和早期治療，提高患者生活質量；因此乳腺癌診治方法的研究對我國有著特殊而重要的社會意義，同時也形成了相關醫藥產品的巨大市場，蘊藏著不可估量的經濟效益。

SELEX技術(即系統進化指數富集技術)是20世紀90年代初研制/發展起來的一種新的組合化學技術，其運用大容量的隨機寡核苷酸文庫，結合體外PCR擴增技術，以指數富集與靶分子特異結合的寡核苷酸，經過多輪篩選，獲得親和力高、特異性強的核苷酸適配子(aptamers)。該技術已成功運用于許多靶分子的篩選，包括金屬離子、有機染料、藥物、蛋白質、氨基酸以及各種細胞因子等。這種方法具有簡便、快速、經濟等特點，與其他組合化學庫如隨機膚/肽庫、抗體庫和噬菌體表面展示文庫相比，從寡核苷酸文庫中篩選出的適配子具許多優勢：a.本身是寡核苷酸，分子量較小，可以化學合成，節約成本。b.具有比抗體更高的親和性和特異性。c.便于標記，可以在不同部位有選擇性的標記。d.重復性好，穩定性好，易于保存，對高溫和劇烈條件不敏感。因此，寡核苷酸適配子/SELEX技術具有良好的應用前景，特別是在抗體工程領域。消減SELEX技術是識別癌與非癌細胞間微小差異、篩選癌細胞特異性親和適配子的有力工具。

研究發現，乳腺癌細胞和正常乳腺細胞有著不同的形態和結構，造成腫瘤細胞特征性形貌的分子基礎可能是腫瘤細胞表面的特異分子、受體等，也可能是癌組織特異標志物，或同一蛋白分子的不同修飾狀態或構象結構，這些特征不會因腫瘤的轉移而丟失。

(三)發明內容：

本發明的目的在于提供一組與人乳腺癌組織高特異性和高親和力的核酸適配子及其制備方法與應用，它利用分子生物學技術中的SELEX技術(即系統進化指數富集技術)采用消減-復合靶SELEX技術對乳腺癌組織和正常乳腺組織進行篩選，獲得與乳腺癌細胞有特異親和能力的核酸適配子，并通過對其核酸適配子特異靶標(腫瘤特異)的鑒定，發現腫瘤治療新的藥物作用靶點，由此可以構建乳腺癌特異的靶向藥物和早期診斷試劑。

本發明的技術方案：一組與人乳腺癌組織高特異性和高親和力的核酸適配子，其特征在于其核苷酸序列選自：

●ATCCGCCTGATTAGCGATACTGCAAAATACGCTGCTCTACTGGCTATCACTCTCGGACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGGG

●ATCCGCCTGATTAGCGATACTTCCCCCAGGCTATTTCCAACTAGCAGCAAGGATAAACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGGG

●ATCCGCCTGATTAGCGATACTGCCTCCCAACCTATTCGCATTGCCCGACGTCAGCTACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGGG

●ATCCGCCTGATTAGCGATACTGACTCCCTCCATCTTCCCGGCTACACTGGTCAGGGACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGGG

●ATCCGCCTGATTAGCGATACTCATTCCACATGTTCTACACCCTAGCCCCGTAGACAACTTGAGCAAAATCACCTGCAGGGG