[發(fā)明專利]基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200610015470.0 | 申請日： | 2006-08-28 |
| 公開（公告）號： | CN101134973A | 公開（公告）日： | 2008-03-05 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張治洲;汪名春;王群;曹小紅 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12P19/34 | 分類號： | C12P19/34;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產(chǎn)權代理有限公司 | 代理人： | 王來佳 |
| 地址： | 300222天*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 納米 金屬 顆粒 片段 核酸 聚合 鏈式反應 擴增 優(yōu)化 方法 | ||
1.一種基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：其優(yōu)化方法是：
(1)單質(zhì)納米金屬膠體溶液的準備；
(2)單質(zhì)納米金屬膠體溶液的滅菌；
(3)PCR體系的配置；
(4)PCR體系的優(yōu)化；
(5)PCR條件的設定與運行；
(6)PCR產(chǎn)物檢測：對擴增好的PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，檢查擴增片段在凝膠中的位置，并與相應的分子量標準做對照。
2.根據(jù)權利要求1所述的基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：所述的PCR體系的優(yōu)化是在long-PCR擴增反應體系中添加其體積比為10～20％的含量為0.01％的單質(zhì)納米金屬膠體溶液。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：所述的單質(zhì)納米金屬膠體溶液是指：納米金屬顆粒直徑0.2～100nm、含量為0.01％的單質(zhì)納米金屬膠體溶液，對于含量大于0.01％的單質(zhì)納米金屬膠體溶液，稀釋為0.01％后使用；對于含量小于0.01％的單質(zhì)納米金屬膠體溶液，直接使用，但添加的量應通過換算后得到。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：所述的單質(zhì)納米金屬膠體溶液中的納米金屬顆粒是指：金、銀及其它納米金屬元素如鉑，鈦，該金屬的納米顆粒也可以以固體顆粒，或單質(zhì)與其他納米材料相互混合或化合的其他狀態(tài)存在，如絡合物狀態(tài)。
5.根據(jù)權利要求1所述的基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：所述的Long-PCR擴增是指：長度不小于10～20kb的DNA片段的擴增。
6.根據(jù)權利要求1所述的基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：所述的Long-PCR擴增包括：高GC含量的Long-PCR擴增、復雜模板Long-PCR、反復擴增的Long-PCR以及含有較多重復序列的DNA片段的擴增。
7.根據(jù)權利要求1所述的基于納米金屬顆粒的長片段核酸聚合酶鏈式反應擴增的優(yōu)化方法，其特征在于：所述的PCR系統(tǒng)中DNA聚合酶包括普通Taq酶以及Pfu酶，或者其他有類似作用的DNA聚合酶或酶組合。
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