[發(fā)明專利]細胞核進入性組合物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580049898.0
• 申請日: 2005-10-03
• 公開（公告）號: CN101184498A
• 公開（公告）日: 2008-05-21
• 發(fā)明（設計）人: 埃瓦爾德·漢納佩爾;托馬斯·赫夫;阿蘭·L.·戈爾茨坦;大衛(wèi)·克羅克福德
• 申請（專利權）人: 雷金納克斯生物制藥公司;埃朗根－紐倫堡弗里德里希·亞歷山大大學
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00
• 代理公司: 隆天國際知識產(chǎn)權代理有限公司
• 代理人: 高龍鑫

本發(fā)明的背景

相關申請的交叉引用

本申請要求2005年5月27日提交的美國臨時申請60/684.993的權益。

技術領域

本發(fā)明涉及用于遞送生理活性劑的組合物和方法的領域。

背景技術

本領域需要改進的用于遞送生理活性劑的組合物和方法。

發(fā)明概述

根據(jù)本發(fā)明，進入細胞核的藥學可接受組合物包括細胞核進入性多肽(nucleus-entering?polypeptide)，該多肽包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTNT或氨基酸序列KSKLKK，或者其保守變異體中的至少一種，所述多肽連接到在所述細胞核內(nèi)具有治療性或診斷性應用中的至少一種應用的生理活性劑上。

發(fā)明詳述

本發(fā)明提供了利用了肌動蛋白-隔離肽(actin-sequesteringpeptide)的組合物和方法，所述隔離肽例如為胸腺素β4(Tβ4、TB4或TBeta4)和包括氨基酸序列LKKTET、LKKTNT或KSKLKK，或者其保守變異體的其他肌動蛋白-隔離肽或肽片段。所述多肽還包括N-或C-末端的變異體，例如KLKKTET和LKKTETQ。這些肽和肽片段對進入細胞核以治療和/或阻止多種狀況，以及影響許多生理功能是有用的。在一些優(yōu)選的具體實施方式中，細胞進入性肽是Tβ4。

生理活性劑可在任何合適的位置連接到細胞進入性肽上。例如，試劑可以連接到Tβ4的N-末端，或在另外一個位置連接到細胞進入性肽的一個氨基酸上，最優(yōu)選的是谷氨酰胺殘基。所述活性劑可以是藥物、化學治療劑、DNA序列、RNA序列、DNA-或RNA-活化或失活劑、診斷劑或類似物。

在優(yōu)選實施方式中，細胞進入性肽穿透核膜從而將所連接的試劑運送入細胞核。核膜優(yōu)選的是哺乳動物核膜，更優(yōu)選的是人核膜。

本發(fā)明也適用于對哺乳動物受試者施用攜帶試劑的細胞進入性肽的方法。該方法包括將受試者的核膜或組織與本文所述的組合物，優(yōu)選藥學可接受的組合物接觸。在優(yōu)選具體實施方式中，受試者是哺乳動物，更優(yōu)選的是人。

胸腺素β4起初被認為是在內(nèi)皮細胞遷移和體外分化期間被上調(diào)的蛋白。胸腺素β4是一個具有43個氨基酸、4.9KDa的普遍存在的多肽，可在多種組織中鑒定到。已經(jīng)記述的該蛋白的幾種功能包括在內(nèi)皮細胞分化和遷移、T細胞分化、肌動蛋白隔離和血管形成中的功能。

胸腺素β4是在多種組織和細胞類型中發(fā)現(xiàn)的、具有高度保守的極性5-KDa多肽的β-胸腺素家族的成員。胸腺素β4最初從胸腺純化并認為是一種胸腺激素，后來又發(fā)現(xiàn)其參與了許多生物過程。作為主要的G-肌動蛋白隔離肽，在細胞增值、遷移和分化期間，它在肌動蛋白裝配的調(diào)節(jié)中起到重要作用。大量研究提示胸腺素β4參與了癌變、發(fā)炎、血管生成和創(chuàng)傷愈合的調(diào)節(jié)。已發(fā)現(xiàn)胸腺素β4的表達通過基于肌動蛋白細胞骨架的組織調(diào)節(jié)了惡性細胞的致瘤性和轉(zhuǎn)移活性。已發(fā)現(xiàn)正在形成微管的內(nèi)皮細胞中胸腺素β4的升高；這提高了它們的附著、擴散和遷移從而促進了血管生成。已在潰瘍提取物和傷口液體中發(fā)現(xiàn)了高濃度的胸腺素β4，從而說明其作為抗細菌因子發(fā)揮作用。幾個使用動物模型的研究已經(jīng)證明了胸腺素β4對創(chuàng)傷愈合的刺激作用。當外用給藥或腹腔內(nèi)施用時，胸腺素β4在大鼠全層模型中增強了皮創(chuàng)傷愈合。在db/db糖尿病小鼠、類固醇-免疫抑制小鼠和年老小鼠中也觀察到了其加速皮創(chuàng)傷愈合的能力。胸腺素β4也表現(xiàn)出加速燒傷后的角膜上皮愈合以及下調(diào)了大量角膜細胞因子和趨化因子，減少了炎癥反應。

血管損傷產(chǎn)生的凝集級聯(lián)活化導致了凝血酶的產(chǎn)生，而凝血酶將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。纖維蛋白自發(fā)聚合而形成血凝塊，血凝塊密封受損的部位從而阻止了血液流失。在后續(xù)的創(chuàng)傷愈合過程中，纖維蛋白也可作為臨時基質(zhì)，使得多種細胞類型在其上粘附、遷移和增殖，從而使正常組織替代纖維蛋白。

胸腺素β4作為組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的特異底物，能夠選擇性地與膠原、肌動蛋白、纖維蛋白原和纖維蛋白，以及在上述過程中涉及的蛋白交聯(lián)。血小板被凝血酶活化后，胸腺素β4以時間依賴性和鈣依賴性方式被釋放并交聯(lián)到纖維蛋白上。