[發明專利]重組血清白蛋白的生產

無效

• 申請號: 200580048594.2
• 申請日: 2005-12-22
• 公開（公告）號: CN101128585A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發明（設計）人: 畢賈克·克里斯坦森;卡斯藤·約爾特;托馬斯·A·波爾森;波爾·巴赫
• 申請（專利權）人: 諾維信公司
• 主分類號: C12N15/67
• 分類號: C12N15/67;C12P21/02;C07K14/765;A61K38/38;C12R1/645;C12R1/66;C12R1/685;C12R1/69
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 張文輝

1.在絲狀真菌宿主生物體中重組表達野生型血清白蛋白多肽的方法，該方法包括在絲狀真菌宿主生物體中表達編碼野生型血清白蛋白多肽的修飾的核酸序列，其中修飾的核酸序列的至少一個密碼子不同于編碼所述野生型血清白蛋白多肽的每種野生型核酸序列。

2.在絲狀真菌宿主生物體中重組表達野生型血清白蛋白的方法，包括步驟：

i)提供編碼野生型血清白蛋白的核酸序列，所述核酸序列包含至少一個修飾的密碼子，其中修飾不改變所述密碼子編碼的氨基酸，而且所述密碼子的核酸序列與編碼野生型基因的核酸序列中的對應密碼子相比是不同的；

ii)在絲狀真菌宿主中表達修飾的核酸序列。

3.依照權利要求1或2任一項的方法，其中血清白蛋白是牛血清白蛋白。

4.依照權利要求1或2任一項的方法，其中血清白蛋白是人血清白蛋白。

5.依照權利要求2的方法，其中編碼野生型基因的核酸序列是SEQ?IDNO：1或3的序列。

6.依照權利要求1的方法，其中至少2個密碼子已經被修飾，特別是至少3個密碼子，更特別是至少5個密碼子，更特別是至少10個密碼子，甚至更特別是至少15個密碼子，最特別是至少25個密碼子已經被修飾。

7.依照權利要求1的方法，其中至少10％的密碼子，特別至少20％，更特別至少30％，更特別至少50％，更特別至少75％的密碼子被修飾。

8.依照權利要求1的方法，其中至少一個密碼子的修飾產生密碼子優化以適合在選擇的宿主生物體中翻譯。

9.依照權利要求7的方法，其中為在絲狀真菌中進行翻譯優化至少一個密碼子。

10.依照權利要求8的方法，其中至少一個修飾的密碼子的密碼子選擇相當于來自米曲霉的α淀粉酶的密碼子選擇。

11.依照在前任一項權利要求的方法，其中絲狀真菌宿主生物體選自支頂孢屬、曲霉屬、鐮孢屬、腐質霉屬、毛霉屬、毀絲霉屬、脈孢菌屬、青霉屬、梭孢殼屬、Tolypocladium或木霉屬。

12.依照權利要求11的方法，其中曲霉屬細胞是泡盛曲霉、臭曲霉、日本曲霉、黑曲霉、構巢曲霉或米曲霉。

13.依照權利要求11的方法，其中宿主細胞是米曲霉或黑曲霉。

14.依照權利要求7的方法，其中血清白蛋白蛋白質由至少10％的密碼子，特別地至少20％、更特別至少30％，更特別至少50％，更特別至少75％的密碼子被優化的核酸序列編碼。

15.依照在前任一項權利要求的方法，其中編碼BSA或HSA的修飾的核酸序列選自由SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：7組成的組。

16.編碼野生型牛血清白蛋白多肽的能在絲狀真菌宿主生物體中表達的修飾的核酸序列，其中所述修飾的核酸序列的至少一個密碼子不同于編碼所述野生型牛血清白蛋白多肽的每個野生型核酸序列。

17.編碼野生型人血清白蛋白多肽的能在絲狀真菌宿主生物體中表達的修飾的核酸序列，其中所述修飾的核酸序列的至少一個密碼子不同于編碼所述野生型人血清白蛋白多肽的每個野生型核酸序列。

18.編碼BSA蛋白質并能在絲狀真菌宿主生物體中表達的修飾的核酸序列，其中通過如下步驟獲取修飾的核酸序列：

i)提供編碼BSA的野生型核酸序列；

ii)修飾至少一個密碼子，其中修飾不改變所述密碼子編碼的氨基酸，而且所述密碼子的核酸序列與野生型基因中的對應密碼子相比是不同的。

19.編碼HSA蛋白質并能在絲狀真菌宿主生物體中表達的修飾的核酸序列，其中通過如下步驟獲取修飾的核酸序列：

i)提供編碼HSA的野生型核酸序列；

ii)修飾至少一個密碼子，其中修飾不改變所述密碼子編碼的氨基酸，而且所述密碼子的核酸序列與野生型基因中的對應密碼子相比是不同的。

20.依照權利要求15或16任一項的修飾的核酸序列，其中至少一個密碼子的修飾產生密碼子優化以適合在曲霉屬菌種中翻譯。

21.依照權利要求16的修飾的核酸序列，其中密碼子選擇相當于來自米曲霉的α淀粉酶的密碼子選擇。