[發(fā)明專(zhuān)利]使用核酸探針、微珠和熒光激活的細(xì)胞分選器(FACS)檢測(cè)人乳頭狀瘤病毒(HPV)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200580040234.8
• 申請(qǐng)日: 2005-12-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101341257A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: K·波特;T·戈?duì)柕?/a>
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杰納羅生物系統(tǒng)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;G01N15/14;C07H21/02;G01N33/48;C12P19/34
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 羅菊華

1.珠子集合，其用于檢測(cè)HPV菌株和/或用于區(qū)分兩種或多種HPV 菌株，其中所述珠子集合包含多個(gè)珠子子集，其中：

(a)每個(gè)子集的珠子是大小均勻的；

(b)每個(gè)子集內(nèi)的珠子與核酸捕獲探針相偶聯(lián)，所述核酸捕獲探 針能結(jié)合HPV基因組的HPV菌株特異性的區(qū)域；

(c)每個(gè)珠子上的捕獲探針標(biāo)有相同的標(biāo)記，每個(gè)珠子子集具有 不同的熒光強(qiáng)度，以建立基于熒光強(qiáng)度的珠子的異質(zhì)混合物，其中所 述核酸捕獲探針選自SEQ?ID?NO：5-20；和

(d)將至少2個(gè)珠子子集混合到一起，產(chǎn)生一個(gè)珠子集合，其中 通過(guò)基于大小、熒光強(qiáng)度和序列辨別的流式細(xì)胞術(shù)，可識(shí)別子集身份， 并從而識(shí)別HPV菌株。

2.權(quán)利要求1的珠子集合，其中所述HPV菌株選自HPV6，HPV11， HPV16，HPV18，HPV31，HPV33，HPV35，HPV39，HPV45，HPV51，HPV52， HPV56，HPV58，HPV59，HPV66和HPV68。

3.權(quán)利要求2的珠子集合，其中所述HPV菌株選自HPV6，HPV11， HPV31和HPV33。

4.權(quán)利要求1的珠子集合，其中所述珠子大小選自3.0μm， 3.5μm，4.1μm，5.0μm，5.6μm和6.8μm。

5.權(quán)利要求1的珠子集合，其中所述珠子用選自下述的熒光染 料進(jìn)行標(biāo)記：羥基香豆素，氨基香豆素，甲氧基香豆素，瀑布藍(lán)，熒 光黃，NBD，Phyccerythrin，PerCP，別藻藍(lán)蛋白，hoechst33342， DAPl，SYTOX?Blue，hoechst33258，色霉素A3，光輝霉素，YOYO-1， SYTOX綠，SYTOX橙，7-AAD，吖啶橙，TOTO-1，To-PRO-1，噻唑橙， TOTO-3，TO-PRO-3，LDS?751，Alexa?Fluor染料，BoDipy染料，CY 染料，6-FAM；Phyccerythrin-Cy5，Phyccerythrin-Cy7，熒光素dT； 六氯熒光素；6-羧基-4′，5′-二氯-2’，7’-二甲氧基熒光素；俄勒岡綠 染料；羅丹明染料；TRI?TC，四甲基羅丹明；羧基四甲基羅丹明；四 氯熒光素；Red?6B，F(xiàn)luorX，BODIPY-FL和德克薩斯紅。

6.權(quán)利要求5的珠子集合，其中所述Alexa?Fluor染料選自Alexa? Fluor-350，-430，-488，-532，-546，-555，-556，-594，-633，-647， -660，-680，-700和-750。

7.權(quán)利要求5的珠子集合，其中所述BoDipy染料選自BoDipy 630/650和BoDipy?650/665。

8.權(quán)利要求5的珠子集合，其中所述CY染料選自Cy2，Cy3， Cy?3.5，Cy5，Cy5.5和Cy7。

9.權(quán)利要求5的珠子集合，其中所述俄勒岡綠染料選自488-X 和514。

10.權(quán)利要求5的珠子集合，其中所述羅丹明染料選自X-羅丹明， 麗絲胺羅丹明B，羅丹明綠，羅丹明紅和ROX。

11.制備權(quán)利要求1的珠子集合的方法，該方法包含選擇多個(gè)珠 子子集，其中：

(a)每個(gè)子集的珠子是大小均勻的；

(b)每個(gè)子集內(nèi)的珠子與核酸捕獲探針相偶聯(lián)，所述核酸捕獲探 針能結(jié)合HPV基因組的HPV菌株特異性的區(qū)域，其中所述核酸捕獲探 針選自SEQ?ID?NO：5至20；

(c)每個(gè)珠子上的捕獲探針標(biāo)有相同的標(biāo)記，每個(gè)珠子子集具有 不同的熒光強(qiáng)度，以建立基于熒光強(qiáng)度的珠子的異質(zhì)混合物；和

(d)將至少2個(gè)珠子子集混合到一起，產(chǎn)生一個(gè)珠子集合，其中 通過(guò)基于大小、熒光強(qiáng)度和序列辨別的流式細(xì)胞術(shù)可識(shí)別子集身份， 并從而識(shí)別HPV菌株。