[發明專利]人抗表皮生長因子受體抗體

有效

• 申請號: 200580015481.2
• 申請日: 2005-03-21
• 公開（公告）號: CN101233155A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發明（設計）人: M·劉;Z·朱
• 申請（專利權）人: 伊姆克羅尼系統公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00;A61P17/06
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉玥

發明領域

[001]本發明關系到表皮生長因子受體(EGFR)特異的單克隆抗體。這些抗體可以用于治療含腫瘤性疾病和過度增生性疾病在內的疾病。

發明背景

[002]正常細胞的增生是通過生長因子酪氨酸激酶(RTKs)被其各自的配體激活所致，該過程是高度受控的。雖然腫瘤細胞的增生也是通過生長因子受體激活達成，但卻失去了對正常增生的精確控制。許多因素可以導致這種失控，如生長因子和/或受體的過度表達，生長因子所調節的生物化學通道的自主激活。涉及到腫瘤生成的RTKs的例子有表皮生長因子受體(EGFR)、血小板源性生長因子(PDGFR)、胰島素樣生長因子(IGEF)、神經生長因子(NGEF)和成纖維細胞生長因子(FGF)。這些生長因子與其細胞表面的受體的結合導致受體被激活，從而激活并改變信號傳導通路，引起細胞增生和分化。

[003]表皮生長因子(EGF)受體家族成員為特別重要的與表皮細胞的腫瘤化有關的生長因子受體酪氨酸激酶。最早發現的EGF受體家族成員為在許多類型的腫瘤細胞上都有表達的EGFR。EGFR被發現涉及到調節腫瘤細胞的分裂、生長、修復、存活、血管生成、浸潤和轉移。

[004]EGFR是一個170kD的跨膜糖蛋白，有一個細胞外配體結合功能域、穿膜區段和一個細胞內蛋白酪氨酸激酶功能域。刺激EGFR的配體包括表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子(TGF-α)、肝素結合生長因子(HBGF)、β-cellulin和Cripto-1。配體的特異性結合引起EGFR自主磷酸化，從而活化細胞內酪氨酸激酶功能域并啟動調節腫瘤生長和存活的多種信號傳導通路。EGFR通路也影響腫瘤內其他血管生成因子，如VEGF和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的產生。

[005]激活EGFR的生長因子被認為也在腫瘤血管生長中發揮重要作用。血管生成指從胚胎和成年生物體已有的血管上形成毛細血管，是已知的腫瘤生長、存活和轉移的關鍵因素。有報道稱EGFR介導的腫瘤細胞刺激導致血管生成因子，血管內皮生長因子(VEGF)、白介素-8(IL-8)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的表達增強，從而引起腫瘤相關的血管內皮細胞的活化。腫瘤相關的血管內皮細胞的刺激也可通過腫瘤產生的生長因子，如TGF-α和EGF激活自身的EGF受體引起。

[006]已有人體腫瘤表達和過量表達EGFR的報道，EGFR的表達與不良預后、低存活率和/或高轉移率成相關關系。EGFR，由于涉及到腫瘤形成，已經成為抗腫瘤治療的特異性靶目標。這些治療主要包括阻斷配體結合到受體細胞外功能域的單克隆抗體或直接作用于細胞內區段以防止信號傳導的合成的酪氨酸激酶抑制劑。

[007]例如，Cetuximab?Mab()為一種能夠與人EGFR細胞外功能域特異性結合的重組人/鼠嵌合的單克隆抗體，Cetuximab是一種阻斷配體與EGFR結合、防止受體活化，從而抑制表達EGFR的腫瘤細胞生長的EGFR拮抗劑。西妥昔單抗(Cetuximab)已被批準與依立替康聯合或單獨用藥以治療表達表皮生長因子受體的、對基于依立替康的化療無效或不耐受的轉移結腸直腸癌患者。西妥昔單抗也已顯示出其對銀屑病的效果。

發明概述

[008]本發明提供特異于EGFR、優選特異于包括選自含有SEQ?IDNO：2、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：10、SEQ?ID?NO：12、SEQ?ID?NO：14的一組序列的EGFR細胞外區的從1到6的互補決定區的任何區域的單克隆抗體或其片段。優選抗體為人源性抗體，更優選的是本發明中的抗體或其片段含有SEQ?ID?NO：2、SEQ?IDNO：4、SEQ?ID?NO：6。可選但也是優選的是本發明中的抗體或其片段含有SEQ?ID?NO：10、SEQ?ID?NO：12、SEQ?ID?NO：14。更為優選的是本發明中的抗體或其片段含有SEQ?ID?NO：8重鏈可變區和SEQ?ID?NO：16輕鏈可變區。本發明中的這些抗體或其片段具有多種特性，包括中和EGFR及防止EGFR的配體與其受體的結合的能力。

[009]此外，本發明提供編碼本抗體及其片段的分離的多核苷酸，同時也提供含有被操作性地連接到表達序列上的這些多核苷酸序列的表達載體。本發明也提供含有表達載體或其子代的重組宿主細胞，該細胞表達本發明中的抗體或其片段。本發明還提供生產這些抗體或其片段的方法，包括在一定條件下培養細胞以使抗體或其片段得以表達，然后從細胞或細胞培養基中純化獲得抗體或其片段。