[發明專利]人肽轉運蛋白2編碼序列、其制備方法及用途

無效

• 申請號: 02111411.0
• 申請日: 2002-04-18
• 公開（公告）號: CN1377965A
• 公開（公告）日: 2002-11-06
• 發明（設計）人: 余龍;唐麗莎
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07K14/435;C07K14/47;C07K16/18;C07H21/00;C12P21/02;C12Q1/68
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛

技術領域

本發明涉及基因工程領域，具體地，本發明涉及一種新的人基因核苷酸序列。更具體地說，本發明涉及人肽轉運蛋白2的cDNA序列以及該序列編碼的多肽。本發明還涉及所述多核苷酸序列和所述多肽的生產方法，以及這些多核苷酸和所述多肽的用途。

背景技術

肽轉運是一種可溶性載體在外界提供能量條件下，把肽分子轉運通過細胞膜的特異性生化過程。小分子肽轉運對生物體的正常生理功能有重要作用。例如，在哺乳動物的神經系統，各種氨基酸和神經肽實施著神經信號傳導，細胞代謝和細胞體積調節等各種功能。神經肽在完成其作用后就需要從胞外空間去除，同時將多余的谷氨酸鹽轉運出突觸小泡。在腦中，肽轉運過程可能有助于消除被降解的神經肽，也有可能有助于吸收有生物活性的肽段(Yamashita?T，Shimada?S，Guo?W，et?al，1997，J?Biol?Chem272(15)：10205-11)。

近年來研究發現一些口服肽類似物是通過腸多肽轉運系統(IPTS)吸收的，IPTS機制的發現拓展了藥物吸收途徑，為許多多肽藥物提供了安全高效的吸收途徑。將藥物設計成二肽、三肽類似物形式的前體藥物，經IPTS通過腸紋緣膜，前體藥物定位于上皮細胞膜，在上皮外表面被酶水解釋放出母體藥物，或完全吸收后在排出細胞前被細胞內的多肽酶或酷酶水解釋放出母體藥物，發揮藥效。目前，可通過IPTS吸收的藥物有p-內酰胺抗生素、頭孢菌素、青霉素、ACE抑制劑、腎素抑制劑、苯丁抑制素、凝血酶抑制劑、促甲狀腺素釋放素及其類似物。其中，苯丁抑制素是含有獨特氨基酸的二肽，具有抗癌活性，臨床上常以口服劑型的形式用于癌癥治療(《國外醫學藥學分冊》2000，27(5)：301～304)。

肽轉運過程廣泛存在于細菌、植物和哺乳動物組織中。研究表明，模式真核生物Saccharomyces?cerevisiae有兩種截然不同的肽轉運機制，一種是轉運兩肽/三肽的PTR體系；另一種是轉運四肽/五肽的OPT體系。PTR體系有三個基因，PTR1，PTR2和PTR3。由PTR2基因編碼的轉運載體PTR2P是一個含有十二個跨膜區域的內在蛋白，主要轉運二肽/三肽，PTR家族成員已在多種生物中被鑒定。(Hauser?M，Narita?V，DonhardtAM，Naider?F，Becker?JM.(2001)Mol?Membr?Biol，18(1)：105-12)。然而，本發明的人肽轉運蛋白2尚未被報道或發表過。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種新的多核苷酸，該多核苷酸編碼轉運蛋白家族的一個新成員，本發明的蛋白被命名為人肽轉運蛋白2(human?peptide?transport?protein，hPTR2)。

本發明的另一個目的是提供一種新的轉運蛋白家族成員，該蛋白被命名為人hPTR2。

本發明的再一個目的是提供一種利用重組技術生產所述的人hPTR2的方法。

本發明還提供了hPTR2基因序列和多肽的應用。

在本發明的一個方面，提供了一種分離出的DNA分子，它包括：編碼具有人hPTR2蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸30-1760位的核苷酸序列有至少90％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度嚴緊條件下與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸30-1760位的核苷酸序列雜交。較佳地，所述的序列編碼一多肽，該多肽具有SEQ?ID?NO.2所示的序列。更佳地，該序列具有SEQ?ID?NO.1中從30-1760位的核苷酸序列。

在本發明的另一方面，提供了一種分離的hPTR2蛋白多肽，它包括：具有SEQ?ID?NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?IDNO.2序列的多肽。

在本發明的另一方面，提供了一種載體，它含有上述分離出的DNA。

在本發明的另一方面，提供了一種所述載體轉化的宿主細胞。

在本發明的另一方面，提供了一種產生具有hPTR2蛋白活性的多肽的方法，該方法包括：

(a)將編碼具有hPTR2蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地連于表達調控序列，形成hPTR2蛋白表達載體，所述的核苷酸序列與SEQ?ID?NO.1中從核苷酸30-1760位的核苷酸序列有至少90％的同源性；

(b)將步驟(a)中的表達載體轉入宿主細胞，形成hPTR2蛋白的重組細胞；

(c)在適合表達hPTR2蛋白多肽的條件下，培養步驟(b)中的重組細胞；