[發(fā)明專(zhuān)利]酶法快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 01802073.9 | 申請(qǐng)日： | 2001-06-20 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN1392901A | 公開(kāi)（公告）日： | 2003-01-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 樸英美;崔恩美;崔真熙;金性勛;白先熙;李上燮 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 樸英美 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/26 | 分類(lèi)號(hào)： | C12Q1/26 |
| 代理公司： | 中原信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 | 代理人： | 丁業(yè)平,王維玉 |
| 地址： | 韓國(guó)*** | 國(guó)省代碼： | 暫無(wú)信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 快速 定量 測(cè)定 氧化 原型 谷胱甘肽 | ||
1.一種用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，包括：
(i)獲取組織樣品，然后制備代謝被阻斷的組織勻漿；
(ii)在采用和不用GSH誘捕劑的情況下制備等體積的勻漿級(jí)分，并將磷酸緩沖液、蒸餾水和NADPH溶液加入到每個(gè)級(jí)分中；
(iii)將谷胱甘肽還原酶和氧化劑加入到每個(gè)級(jí)分中啟動(dòng)反應(yīng)；和
(iv)在采用和不用GSH誘捕劑的情況下測(cè)定含有所述級(jí)分的反應(yīng)混合物以分別定量測(cè)定氧化型谷胱甘肽(GSSG)和總谷胱甘肽，然后從總谷胱甘肽中減去GSSG量從而確定還原型谷胱甘肽(GSH)的量。
2.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中組織樣品從動(dòng)物或植物來(lái)源獲得。
3.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中組織勻漿由在-70℃時(shí)冷凍干燥組織樣品并用5％PCA(高氯酸)溶液處理組織樣品阻斷其代謝而獲得。
4.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中GSH誘捕劑為N-乙基馬來(lái)酰亞胺(NEM)。
5.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中GSH誘捕劑加入到級(jí)分中使終濃度達(dá)到20-100mM。
6.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中2-3倍體積的磷酸緩沖液加入到級(jí)分中使終濃度達(dá)到50-150mM。
7.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中6-7倍體積的蒸餾水加入到級(jí)分中。
8.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中20-30％(v/v)的NADPH溶液加入到級(jí)分中使終濃度達(dá)到0.1-0.3mM。
9.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中10-15％(v/v)的谷胱甘肽還原酶加入到級(jí)分中使終濃度達(dá)到0.05-0.2U/ml。
10.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中氧化劑為5，5’-二硫代雙-(2-硝基苯甲酸)(DTNB)。
11.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中10-15％(v/v)的氧化劑加入到級(jí)分中使終濃度達(dá)到0.02-0.1mM。
12.權(quán)利要求1的用于快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中在405nm處測(cè)定吸光度。
13.一種使用多孔板快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，包括：
(i)將磷酸緩沖液、蒸餾水和NADPH溶液分配到多孔板的每個(gè)孔中；
(ii)將等體積的經(jīng)NEM處理的或未處理的樣品加入到每個(gè)孔中，接著將谷胱甘肽還原酶和DTNB加入到每個(gè)孔中啟動(dòng)反應(yīng)；和
(iii)測(cè)定含有經(jīng)NEM處理樣品的反應(yīng)混合液的吸光度以定量氧化型谷胱甘肽(GSSG)，以及測(cè)定含有未經(jīng)NEM處理樣品的反應(yīng)混合液的吸光度以定量總谷胱甘肽，然后從總谷胱甘肽中減去GSSG量從而確定還原型谷胱甘肽(GSH)的量。
14.權(quán)利要求13的使用多孔板快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中2-3倍體積的磷酸緩沖液加入到樣品中使終濃度達(dá)到50-150mM。
15.權(quán)利要求13的使用多孔板快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中6-7倍體積的蒸餾水加入到樣品中。
16.權(quán)利要求13的使用多孔板快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中20-30％(v/v)的NADPH溶液加入到樣品中使終濃度達(dá)到0.1-0.3mM。
17.權(quán)利要求13的使用多孔板快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中NEM加入到樣品中使終濃度達(dá)到20-100mM。
18.權(quán)利要求13的使用多孔板快速定量測(cè)定氧化型和還原型谷胱甘肽的方法，其中10-15％(v/v)的谷胱甘肽還原酶加入到樣品中使終濃度達(dá)到0.05-0.2U/ml。
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