[發明專利]包括白喉類毒素、破傷風類毒素、全細胞百日咳和乙型肝炎表面抗原的四價聯合疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 01801925.0
• 申請日: 2001-07-05
• 公開（公告）號: CN1383384A
• 公開（公告）日: 2002-12-04
• 發明（設計）人: 裴干淳;林官悅;樸景南;金洪周;嚴達浩;金鐘垂
• 申請（專利權）人: 綠十字疫苗株式會社
• 主分類號: A61K39/29
• 分類號: A61K39/29
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 樊衛民

????????????????????????發明領域

本發明涉及一種包括白喉類毒素、破傷風類毒素、全細胞百日咳苗和乙型肝炎表面抗原的四價聯合疫苗(以下稱DTwPH聯合疫苗)及其制備方法。

在世界衛生組織(WHO)的擴大免疫計劃(EPI)中，推薦同時接種抗白喉、破傷風和百日咳的DTP聯合疫苗作為幾乎全世界國家嬰兒使用的基本疫苗。在東南亞、中亞、非洲和南美東南亞最為普遍的乙肝感染，被認為是肝癌的一種潛在起因。然而，乙肝感染也可通過免疫來預防，因此WHO積極開展全世界乙肝疫苗接種活動。

最近，為了消除單獨接種具有不同接種程序的DTP聯合疫苗和乙肝疫苗的麻煩，以及將這些疫苗以降低的價格供應給不發達國家以增加其疫苗接種率，現已有商業化的包括白喉類毒素、破傷風類毒素、無細胞百日咳和HBsAg的聯合疫苗產品(DTaPH)(歐洲專利公布號0642355B1，6月15日，1998；韓國專利公布號1992-0009729，綠十字公司)。

?????????????????發明背景

與DTwPH聯合疫苗的制備相關進行了積極研究，以解決這種聯合疫苗藥物制備中遇到的問題，在保留HBsAg免疫原性的同時防止毒性的增加。

在聯合疫苗藥物制備中發生的問題包括單個疫苗溶液的聚集和疫苗對玻璃貯藏瓶的粘附。這里，術語“聚集”指形成輕微搖動不能使其懸浮的固體物質，術語“粘附”指DTwPH聯合疫苗顆粒結合到貯藏玻璃瓶壁上，結合很牢固，輕微搖動不能使其分離。DTwPH聯合疫苗中的聚集是由各疫苗吸附溶液和百日咳桿菌之間尤其是用作吸附劑的氫氧化鋁凝膠和百日咳桿菌之間的靜電引力引起的。這種粘附由DTwPH聯合疫苗顆粒和玻璃瓶壁之間長期的反應引起。因為DTwPH聯合疫苗長期貯存，聚集和粘附現象使聯合疫苗產品的穩定性嚴重降低。

DTwPH聯合疫苗由于吸附劑和蛋白過量而具有毒性增加的問題。此外，因為HBsAg與其它抗原相容性差，與同時接種兩種單獨的疫苗DPT聯合疫苗和乙肝疫苗相比，其免疫原性降低(WHO總部，白喉-破傷風-百日咳-乙肝四價疫苗非正式會議，1992)。

因此，本發明目的是有效防止上述“聚集”和“粘附”現象，也提供一種新的DTwPH聯合疫苗及其制備方法，可保留HBsAg的免疫原性，使其與同時接種單獨的三價DTP聯合疫苗和單一抗原乙肝疫苗具有相同的幾何平均抗體滴度(ab?GMT)和有效抗體生成率。

??????????????????發明詳述

本發明提供了一種新的四價DTwPH聯合疫苗，包括白喉類毒素、破傷風類毒素、全細胞百日咳和HBsAg，其中白喉類毒素和破傷風類毒素吸附于磷酸鋁凝膠(AlPO₄)，HBsAg吸附于氫氧化鋁凝膠(Al(OH)₃)。

本發明也提供了DTwPH聯合疫苗的制備方法，包括(a)在制備最終的DTwPH聯合疫苗組合物之前，調節吸附白喉類毒素的磷酸鋁凝膠溶液、吸附破傷風類毒素的磷酸鋁凝膠溶液、吸附HBsAg的氫氧化鋁凝膠溶液和百日咳貯備溶液的pH范圍為6.5-7.5；(b)將調整了pH的白喉類毒素和破傷風類毒素吸附溶液混合；和(c)將在步驟(b)中獲得的混合物與調整了pH的HBsAg吸附溶液和滅活百日咳貯備液混合。

本發明也提供了聯合疫苗貯藏方法，包括將明膠加入普通聯合疫苗或上述DTwPH聯合疫苗，或使用硅涂層的玻璃瓶作為聯合疫苗的貯藏瓶。優選明膠的濃度范圍為0.1-0.7w/v％。

以下將更詳細地描述本發明的結構和作用。

本發明使用的白喉類毒素貯備液通過培養白喉桿菌(Corynebacterium?diphtheriae)Park?Willium株制備。將產生的培養上清過濾、沉淀及福爾馬林去毒后純化，獲得適當的白喉類毒素貯備液。可使用上述以外的菌株和方法來獲得適當的白喉類毒素貯備液。

破傷風類毒素貯備液通過培養破傷風桿菌(Clostridium?tetani)Harvard株制備。將產生的培養上清液過濾、沉淀及福爾馬林去毒后純化，獲得適當的白喉類毒素貯備液。可使用上述以外的菌株和方法來獲得適當的白喉類毒素貯備液。

百日咳貯備液通過培養百日咳桿菌(Bordetella?pertussis)制備。將產生的培養液離心。獲得的百日咳沉淀懸浮在鹽水中并通過處理滅活，獲得適當的滅活百日咳貯備液。可使用上述以外的菌株和方法來獲得適當的百日咳貯備液。