[發明專利]重組葡激酶(126)的制備方法

無效

• 申請號: 01144248.4
• 申請日: 2001-12-14
• 公開（公告）號: CN1394952A
• 公開（公告）日: 2003-02-05
• 發明（設計）人: 趙玉山;崔維初;苗得足;李廣
• 申請（專利權）人: 山東瑞陽制藥有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21
• 代理公司: 淄博科信專利代理有限公司
• 代理人: 馬俊榮

?????????????????????????????技術領域

本發明涉及一種重組葡激酶(126)的制備方法，屬于生物工程技術領域。

?????????????????????????????背景技術

心腦血管疾病是一種普遍的多發病，危害性極大。

葡激酶Sak是來源于金黃色葡萄球菌的一種非酶蛋白。它象鏈激酶SK一樣，與纖溶酶原結合形成復合物，去催化纖溶酶原轉化為纖溶酶，然后對血纖維蛋白進行水解。Sak優先選擇與血栓上的纖溶酶原結合，水解其中的血纖維蛋白，當血漿中不存在血栓時，血纖維蛋白溶酶則被血漿中的(α-AP)中和，不降低凝血系統中的纖維蛋白原，不易引起全身性溶血。具有分子量小、滲透性好、溶栓速度快、副作用小等特點。用于心肌梗塞、腦栓塞、肺栓塞等疾病的治療。

成熟的葡激酶分子中含有136個氨基酸，肽鏈中沒有二硫鍵，對溶液中成熟葡激酶分子構象研究表明，分子中有兩個相似大小的結構域，中心距為3.7nm，分子形狀類似一個易變的“啞鈴”。葡激酶在分離過程中經常以三種形式存在：成熟SaK，成熟SaK分子N-末端降解6個和10個氨基酸的產物，即Sak-M、SaK-Δ6和Sak-Δ10，Sak-ΔN10分子量更低，在與纖溶酶原作用過程中，效果更好。

已有藥理試驗表明，曾對100名急性心肌梗塞病人的臨床試驗中(52名患者使用r-tPA；48名患者使用r-SAK，其中25名10mg，23名20mg劑量)，比較了r-Sak兩個劑量(10mg和20mg)，20分鐘一次性滴注給藥與r-tPA(商品名Alteplase)治療效果。實驗結果表明，r-Sak動脈早期開通作用明顯。從開通的程度比較：r-Sak最適劑量20mg，90分鐘內TIMI-3開通率較r-tPA高。另一項在30名外周動脈栓塞患者使用體內導管引導法進行r-Sak給藥，對r-Sak的溶栓效應，安全性及纖維蛋白專一性和在病人體內的免疫原性進行了研究。結果表明，r-Sak的溶栓有效性及動脈再通的結果非常好，r-Sak具有明顯的纖維蛋白專一性。生產重組葡激酶(126)，市場前景廣闊。

?????????????????????????????發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種簡單易行，操作方便，能獲得高純度產品，生產周期短，效率高，可實現大規模工業化生產制備葡激酶(126)的制備方法。

本發明所述的重組葡激酶(126)，其基因全DNA序列及其編碼的氨基酸為：

AAG???GGC???GAT???GAC???GCG???AGT???TAT???TTT???GAA???CCA

?Lys??Gly???Asp???Asp???Ala???Ser???Tyr???Phe???Glu???Pro

ACA???GGC???CCG???TAT???TTG???ATG???GTA???AAT???GTG???ACT

?Thr??Gly???Pro???Tyr???Leu???Met???Val???Asn???Val???Thr

GGA???GTT???GAT???GGT???AAG???GGA???AAT???GAA???TTG???CTA

?Gly??Val???Asp???Gly???Lys???Gly???Asn???Glu???Leu???Leu

TCC???CCT???CGT???TAT???GTC???GAG???TTT???CCT???ATT???AAA

?Ser??Pro???Arg???Tyr???Val???Glu???Phe???Pro???Ile???Lys

CCT???GGG???ACT???ACA???CTT???ACA???AAA???GAA???AAA???ATT

?Pro??Gly???Thr???Thr???Leu???Thr???Lys???Glu???Lys???Ile

GAA???TAC???TAT???GTC???GAA???TGG???GCA???TTA???GAT???GCG

?Glu??Tyr???Tyr???Val???Glu???Trp???Ala???Leu???Asp???Ala

ACA???GCA???TAT???AAA???GAG???TTT???AGA???GTA???GTT???GAA