[發明專利]一種多肽——殼三糖酶－52.03和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01112772.4
• 申請日: 2001-04-26
• 公開（公告）號: CN1382800A
• 公開（公告）日: 2002-12-04
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/47
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——殼三糖酶-52.03，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

本發明公開了一種新的多肽——殼三糖酶-52.03，編碼此多肽的多核苷酸和經DNA重組技術產生這種多肽的方法。本發明還公開了此多肽用于診治多種疾病的方法，如大葉性肺炎，中耳炎，乳突炎，脊髓灰質炎病毒，腫瘤，超敏反應等。本發明還公開了抗此多肽的拮抗劑及其診治作用。本發明還公開了編碼這種新的殼三糖酶-52.03的多核苷酸的用途。

殼三糖酶是糖基化水解酶家族的成員，殼三糖酶基因位于染色體1q31-q32位點。此基因含有20個外顯子，它的長度為20kb。激活后的殼三糖酶基因的外顯子3′端接合位點會產生24base的復制子，并能產生一個87核苷酸的閱讀框。

殼三糖酶由活化的巨噬細胞所合成，在Gaucher疾病的病人的血液和組織中殼三糖酶的活性被顯著提高，這是由于病人的脂質性巨噬細胞的擴增而大量產生和分泌引起的。殼三糖酶能使殼質降解，它也被認為是幾丁質酶同源體。植物中的幾丁質酶同源體被確認有抗真菌的作用，而噬菌細胞中殼三糖酶也調節控制著含有角質的病原體的降解。幾丁質酶家族的其它成員包括：oviductin(人輸卵管特殊的糖蛋白酶)，人軟管糖蛋白39(HCgp-39)，以及YKL39。殼三糖酶的主要結構為50kDa分子量的物質和5.0-7.2異類pI。二級結構包含39kDa分子量的物質和不連續的8.1的pI。培養的巨噬細胞顯示了新陳代謝過程中50-kDa殼三糖酶首先開始合成并在轉譯后矯正。首先，蛋白質羧基末端的O-的糖基化在電荷上產生不同成分。第二，50-kDa的酶是分泌產生的，它在細胞中羧基末端水解成39-kDa的行式并在細胞中的溶酶體中堆積。遺傳性的殼三糖酶活性不足經常出現，在新西蘭每20個人中就有一個人殼三糖酶觸活性不足，包括在血漿，尿液，培養的巨噬細胞，白細胞球和組織中出現殼三糖酶觸活性不足的情況。該殼三糖酶的作用異常將影響生物體對含有角質的病原體的降解，進而影響體內免疫反應，即引發一系列與之相關的免疫紊亂性疾病。

本發明的人的該酶與殼三糖酶在蛋白水平上有的54％相同性和71％的相似性。且兩者均含有殼三糖酶家族的特征性結構域。基于以上各點，故認為本發明的蛋白為殼三糖酶，命名為殼三糖酶-52.03。并以此推斷其與殼三糖酶相似，同為殼三糖酶家族的成員，并具有相似的生物學功能。其突變或表達異常將導致相關免疫途徑的異常，進而引發各種相關的疾病。

由于如上所述殼三糖酶-52.03蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的殼三糖酶-52.03蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新殼三糖酶-52.03蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——殼三糖酶-52.03以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼殼三糖酶-52.03的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼殼三糖酶-52.03的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產殼三糖酶-52.03的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——殼三糖酶-52.03的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——殼三糖酶-52.03的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與殼三糖酶-52.03異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。