[發(fā)明專利]堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01110756.1
• 申請(qǐng)日: 2001-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN1381725A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閻美容;舍英;侯金鳳;陳必珍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 呼和浩特同日試劑有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種水解酶——堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，屬于酶學(xué)領(lǐng)域。

近年來，酶學(xué)在臨床診斷與治療中的應(yīng)用發(fā)展非常迅速，現(xiàn)已分別發(fā)展為醫(yī)學(xué)中的兩個(gè)新領(lǐng)域，即診斷酶學(xué)和治療酶學(xué)。目前已有上百種酶試驗(yàn)可用于臨床診斷。臨床酶學(xué)的這一發(fā)展，部分是由于測(cè)定技術(shù)的發(fā)展，使許多酶的測(cè)定已日益精確和簡(jiǎn)便，可用于常規(guī)測(cè)定。部分是由于認(rèn)識(shí)到某些疾病發(fā)展過程中酶活力必然發(fā)生改變這一客觀事實(shí)，特別是在疾病的早期，用X光片、CT還未能發(fā)現(xiàn)病灶時(shí)，而體內(nèi)的酶活性已開始發(fā)生變化。如果能定期查體，可做到對(duì)疾病的早期發(fā)現(xiàn)。值得一提的是，目前臨床上診斷酶學(xué)的應(yīng)用多數(shù)是對(duì)酶的總活性的測(cè)定，并且市場(chǎng)上已有相應(yīng)試劑盒銷售，其缺點(diǎn)是缺乏器官特異性。目前有關(guān)酶活性測(cè)定的試劑盒約有20～30種，同工酶檢測(cè)試劑盒約有3～5種，但多數(shù)用的是化學(xué)抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白結(jié)構(gòu)不同而具有相同的催化特性的一類酶，不同的同工酶來自不同的組織和細(xì)胞。當(dāng)某一組織或器官發(fā)生病變時(shí)，由于組織受損或細(xì)胞膜通透性的變化，引起細(xì)胞內(nèi)酶大量釋入血液而引起血清酶活性的改變。通過同工酶的檢測(cè)可確定患病部位，從而提高酶學(xué)診斷的特異性和敏感性，還可判斷預(yù)后。目前由于自行配制酶顯示液，因所用試劑品種繁多，規(guī)格不一，致使酶顯示結(jié)果不穩(wěn)定，結(jié)果判定不統(tǒng)一，且同工酶檢測(cè)操作較繁瑣，費(fèi)時(shí)等等，特別是大型生化分析儀的應(yīng)用，使臨床生化檢測(cè)的操作更簡(jiǎn)便，省時(shí)、省力，但其是對(duì)總酶活性的測(cè)定，缺乏組織特異性，相比較，同工酶的檢測(cè)使病變?cè)缙诙ㄐ院投ㄎ痪途_的多了。

本發(fā)明的目的在于提供一種質(zhì)量?jī)?yōu)良、性能穩(wěn)定、重復(fù)性能好，同時(shí)大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)的操作過程且使用該試劑盒可使同工酶的檢測(cè)操作規(guī)范化，從而使酶活性的檢測(cè)及質(zhì)量控制達(dá)到統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)的水解酶診斷試劑盒的制備。

本發(fā)明的目的由如下技術(shù)方案實(shí)施：

做醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有：(1)、配制濃度為0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、用冰乙酸做為固定劑；(3)、配制濃度為0.03～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液；將(3)所述的泡醋纖膜緩沖液分裝安瓿A中；將(2)所述的固定劑分裝安瓿E；(4)配制顯色液

(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中，

(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；

(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內(nèi)容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內(nèi)容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液為100ml～250ml分裝安瓿B，用時(shí)將安瓿D加水加熱溶解，然后將安瓿B、安瓿C、安瓿D的內(nèi)容物混合即為顯色液。

做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有：

(1)、配制濃度為0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0

(2)、用冰乙酸做為固定劑分裝安瓿E；

(3)、瓊脂糖凝膠的配制：將瓊脂糖(或瓊脂)0.5g-1g加入濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液80ml～120ml，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；或瓊脂糖凝膠的配制也可以是將瓊脂糖(或瓊脂)、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比分別為7.0％～32.3％、55.6％～91.0％、1.4％～19.4％，加入100ml～250ml濃度為0.05mol/L～0.2mol/L的泡醋纖膜緩沖液，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A。

(4)配制顯色液

(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中，

(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；

(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內(nèi)容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內(nèi)容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液100ml～250ml分裝安瓿B，用時(shí)將安瓿B、安瓿C、安瓿D的內(nèi)容物混合即為顯色液。