[發明專利]堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備

無效

• 申請號: 01110756.1
• 申請日: 2001-04-20
• 公開（公告）號: CN1381725A
• 公開（公告）日: 2002-11-27
• 發明（設計）人: 閻美容;舍英;侯金鳳;陳必珍
• 申請（專利權）人: 呼和浩特同日試劑有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，做醋酸纖維素薄膜電泳，其包括有：(1)、配制0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0；(2)、將冰乙酸做為固定劑；(3)、配制0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液；其特征在于：將(3)所述的泡醋纖膜緩沖液分裝安瓿A中；將(2)所述的固定劑分裝安瓿E；(4)配制顯色液：

(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中；

(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；

(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液為100ml～250ml分裝安瓿B，用時將安瓿B加入安瓿C內、安瓿D的內容物加水加熱溶解，然后將安瓿B、安瓿C的混合液，加入安瓿D內混合即為顯色液。

2、一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，做瓊脂糖凝膠電泳，其包括有：

(1)、配制濃度為0.02～0.1mol/L電極液，pH為7.5-9.0；

(2)、用冰乙酸做為固定劑；其特征在于：將(2)所述的固定劑分裝安瓿E；

(3)、瓊脂糖凝膠的配制：將瓊脂糖(或瓊脂)0.5g-1g加入濃度為0.05～0.2mol/L泡醋纖膜緩沖液80ml～120ml，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A；

(4)配制顯色液

(a)、配制濃度為0.05～0.3mol/L緩沖液，pH為9.0～11.0，分裝安瓿B中，

(b)將底物和重氮鹽染料分裝安瓿C；

(c)、將瓊脂糖或瓊脂分裝安瓿D；其中安瓿C中的內容物底物和重氮鹽染料、安瓿D中的內容物瓊脂糖或瓊脂，按重量百分比，底物、重氮鹽染料、瓊脂糖或瓊脂分別為20.0％～86.7％、10.5％～75.2％、1.2％～28.6％，將濃度為0.05～0.3mol/L的緩沖液為100ml～250ml分裝安瓿B，用時將安瓿B、安瓿C、安瓿D的內容物混合即為顯色液。

3、根據權利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于顯色時在所述顯色液中加入特異性抑制劑分裝安瓿F，其中安瓿F中可加入濃度為5～10mM?L-苯丙氨酸，抑制ALP4、ALP5；或濃度為5～10mM?L-高精氨酸，抑制ALP2；或濃度為5～10mM?L-色氨酸或亮氨酸，抑制ALP4；或濃度為3～5M尿素，抑制ALP3；或濃度為1M乙二胺四乙酸，抑制ALP2、ALP3、ALP5。

4、根據權利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述安瓿B中配制的緩沖液，可用Tris系列的緩沖液、磷酸系列的緩沖液或硼酸緩沖液、二氨基二甲基1.3丙二醇-HCL緩沖液。

5、根據權利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述安瓿C中底物可用萘酚或它的衍生物的磷酸酯，如α-萘酚磷酸或β-萘酚磷酸或α-萘酚磷酸鹽類化合物、萘酚AS-MX磷酸、萘酚AS-BI磷酸，或其萘酚AS-MX磷酸鹽類和萘酚AS-BI磷酸鹽類，甲苯胺-5-溴3-吲哚磷酸、硝基苯-5-溴-3-吲哚磷酸、磷酸甲苯胺鹽；重氮鹽染料可用固藍B或固藍BB、固藍R或固藍RR、固紫B、柘石榴紅GBC、固紅RC、固紅TR、六偶氮付品紅等。

6、根據權利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述顯色液的配制，其中所述安瓿B內裝緩沖液和底物，溶解后冷凍干燥；其是將0.3g-1.5g底物加入100ml-250ml緩沖液溶解后分裝安瓿B。

7、根據權利要求1或2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述顯色液的配制，其中所述安瓿C內裝緩沖液和重氮鹽染料，溶解后冷凍干燥，其是將0.2g-1g的重氮鹽染料加入100ml-250ml的緩沖液溶解后分裝安瓿C。

8、根據權利要求2所述的一種堿性磷酸酶同工酶診斷試劑盒的制備，其特征在于所述瓊脂糖凝膠的配制也可以是將瓊脂糖(或瓊脂)、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮，按重量百分比分別為7.0％～32.3％、55.6％～91.0％、1.4％～19.4％，加入100ml～250ml濃度為0.05mol/L～0.2mol/L的泡醋纖膜緩沖液，加熱溶解，趁熱分裝，制備為安瓿A。