[發明專利]一種多肽——間隙連接蛋白－12.21和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105896.X
• 申請日: 2001-04-10
• 公開（公告）號: CN1380308A
• 公開（公告）日: 2002-11-20
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——間隙連接蛋白-12.21，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在組織中，細胞之間能夠通過特定的胞間通道分享離子、第二信使和小的代謝產物，稱為間隙連接。實現這種功能的連接子由一種完整的膜蛋白的六聚體組成，這種膜蛋白通常稱為間隙連接蛋白(Cx)，一個通道包含了分別位于兩個細胞上的兩組六聚體連接蛋白裝配而成。間隙連接蛋白家族是一個相互聯系的多基因家族，在一個特定的種內，雖然結構上相似，但還存在著許多差異以及組織特異性。

在結構上，單條連接蛋白由一個較短的細胞質N-末端區域，中間肽段彎曲折疊成四個跨膜區段以及兩個胞外、一個胞內的環結構，C-末端也位于細胞質中，并且不同的連接蛋白之間長度有非常大的差異，從20個氨基酸殘基(Cx26)至260個氨基酸殘基(Cx56)不等，整個構象呈不規則的W狀。

間隙連接蛋白家族各個蛋白之間的相似程度約50％-80％，不同之處主要是位于細胞質內的C-末端區域，不管是氨基酸長度還是氨基酸序列都有很大的差異。位于細胞膜外的兩個環非常保守，每個環包含了三個Cys殘基，通過形成二氧化硫鍵來實現細胞與細胞之間的連接。??兩段環結構的保守序列如下：(1)C-[DN]-T-X-Q-P-G-C-X(2)-V-C-Y-D；(2)C-X(3，4)-P-C-X(3)-[LIVM]-[DEN]-C-[FY]-[LIVM]-[SA]-[KR]-P。胞外部位的相似性有助于細胞之間的緊密粘連，而胞內部分的特異性有助于對穿過通道的小分子物質進行必要的選擇，避免一些不需要的或有害的物質的侵入。

間隙連接形成的跨膜通道實現了小分子的從一個細胞向鄰近細胞的擴散，并且實現最合理的物質分配，各取所需。這種細胞間物質的交流有助于調節細胞的活性，包括細胞生長的調節、細胞分化的調節等。細胞粘連后代謝能力也會發生變化，連接蛋白還能作為某些代謝途徑中涉及酶的體細胞突變的抑制劑。細胞膜上酪氨酸激酶受體的激活能抑制間隙連接的胞間交流，比如肝細胞生長因子，其表面含有酪氨酸激酶受體，能夠抑制角化細胞的連接。PTA，一種促腫瘤生長的因素，也能對胞間交流起抑制作用。在人體內，細胞之間物質交流與各種組織器官腫瘤有極為密切的關系，比如乳腺癌、上皮細胞癌、肝細胞癌、人造骨細胞癌等等。Cx43和Cx32在正常肝細胞中大量表達，但在肝細胞癌發生部位，Cx32的表達狀況明顯弱于其周圍非腫瘤區，證明細胞之間的連接受到了影響，使致癌物質的活性明顯下降。另外還發現，婦女懷孕期間和分娩時Cx43的表達也會增加。

由于如上所述間隙連接蛋白-12.21蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的間隙連接蛋白-12.21蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新間隙連接蛋白-12.21蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——間隙連接蛋白-12.21以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼間隙連接蛋白-12.21的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼間隙連接蛋白-12.21的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產間隙連接蛋白-12.21的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——間隙連接蛋白-12.21的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——間隙連接蛋白-12.21的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與間隙連接蛋白-12.21異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。