[發明專利]一種多肽——分泌蛋白－38.17和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 01105748.3
• 申請日: 2001-03-22
• 公開（公告）號: CN1376696A
• 公開（公告）日: 2002-10-30
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——分泌蛋白-38.17，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

本發明公開了一種新的多肽——分泌蛋白-38.17，編碼此多肽的多核苷酸和經DNA重組技術產生這種多肽的方法。本發明還公開了此多肽用于診治多種疾病的方法，如糖尿病、甲狀腺功能亢進、高血壓、癡呆、偏癱、胃腸功能紊亂等。本發明還公開了抗此多肽的拮抗劑及其診治作用。本發明還公開了編碼這種新的分泌蛋白-38.17的多核苷酸的用途。

Exocyst是酵母中最后階段的分泌蛋白。和SNARFs(SNAP的受體)這種重要廣泛的分散在目的膜上的分泌蛋白不同，exocyst存在于特定的囊泡位點。我們分離了編碼人復合物rexo70，rsec5和rsec15位點的cDNA序列。這些基因編碼的氨基酸序列和它們酵母同系物有21％到24％的相同性。所有的這些基因成倍的轉錄并廣泛的表達用以觀察rexo70和resc15，cDNA編碼了84kDa的亞基的新基因，mAbs產生了exocyst復合物的resec6的位點，PC12細胞的末端的點附近發現了rsec6的免疫反應性，此位點位于或靠近小顆粒的胞吐作用的位點。胞吐作用是細胞向外分泌所合成的蛋白、神經介質、激素等分子的途徑，這一過程主要由細胞的分泌小泡來完成，在細胞的分泌小泡和原生質膜融合并釋放分泌物的過程中，ATP和胞液蛋白是必不可少的。現在有研究表明，鈣離子調控分泌作用蛋白在一些如去甲腎上腺素的分泌過程中有重要作用。

細胞膜的基本識別和融合機制作用于調節個體運輸步驟的需要，特定的不同細胞，以及特殊的生理學狀態。列如，神經末端的胞吐作用和鈣元素的濃縮密切相關。另外，極化細胞如神經細胞和上皮細胞必需控制好囊泡的融合位點，特別是SNARE蛋白確定的目標細胞膜的亞基位點。酵母中重要的一系列位點是exocyst復合物。這些基因中的六個確認為酵母分泌蛋白的突變體(SEC3，5，6，8，10，15)。其中的SEC17作為染色體組的特征組成。這七個酵母基因是在一個743kDa的正比復合物中發現的。無論是Sso1p，Sso2p還是Sec9p在血漿細胞膜獨立存在，而exocyst分泌蛋白在芽殖細胞的末梢上是嚴格定位的。研究表明exocyst分泌蛋白在囊泡的融合位點的確定，以及分泌肌體的芽殖位點的選擇和，配極變換中起作用。

Exocyst分泌蛋白的sec6和sec8位點的人類的同族體被鑒定為17s復合物的亞基的組成。抗體作用于這些位點通過復合物的純化的免疫反應性確認。Rsec5，rsec6和rsec15在組織中的表達，rsec6和哺乳動物蛋白B94有24％的相同性，它在胚胎期的神經細胞中有大量的表達但在出生以后逐步減少。這些生長中的組織細胞需要大量生長和分化的分泌物。Rsec6在隱含發張的構成分泌物中起重要作用。它也在角蛋白和血漿的細胞膜的脂質雙分子層的融合中起作用。該分泌蛋白基因在肝臟中以及胃腸道的各處表達，倘若這種細胞發生變異或缺失則會引起各種癌腫(cell?Biology?Vol.94.pp.14438-14443，December?1997)

本發明的多肽與exocyst分泌蛋白在蛋白水平上有97％的同一性及99％的相似性，且具有相似的生物學功能，因而被認為屬于exocyst細胞的一種，命名為分泌蛋白-38.17。該多肽及其激動劑，抑制劑，拮抗劑可用于診斷兼防治各種癌腫，例如前列腺癌等疾病(Bonkhoff?and?Remberger，Prostate?28：98-106(1996)；Bonkhoff(1996))。

由于如上所述分泌蛋白-38.17蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的分泌蛋白-38.17蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新分泌蛋白-38.17蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——分泌蛋白-38.17以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼分泌蛋白-38.17的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼分泌蛋白-38.17的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產分泌蛋白-38.17的方法。