[發(fā)明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白28.71和編碼這種多肽的多核苷酸

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 01105167.1
• 申請(qǐng)日: 2001-01-10
• 公開（公告）號(hào): CN1364791A
• 公開（公告）日: 2002-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C07K16/18;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C07H21/00;C12P21/02;G01N33/68;C12Q1/68;A61K38/17;A61K31/7088;A61P35/00;A61P7/00;A61P31/18;A61P31/00;A61P37/02
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白28.71，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

鋅指蛋白在生物活細(xì)胞中起著重要的作用，其中最重要的是作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子發(fā)揮作用[Berg?J.M.，Shi?Y.et?al.，Science，1996，271：1081-1085]。真核基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控對(duì)于基因的正常表達(dá)是十分重要的，通常由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子來(lái)完成這一調(diào)控過(guò)程。轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子在生物體內(nèi)參與決定基因在何種組織及何種發(fā)育階段開始轉(zhuǎn)錄。編碼這類蛋白的基因如發(fā)生突變，不但該基因自身不能正常表達(dá)，而且受其調(diào)節(jié)的許多基因也不能正常的進(jìn)行轉(zhuǎn)錄與表達(dá)。鋅指蛋白對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控主要通過(guò)與特定的DNA序列結(jié)合來(lái)完成，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)也有一些鋅指蛋白可與RNA結(jié)合以調(diào)節(jié)RNA的代謝。鋅指蛋白在生物體內(nèi)的分別非常廣泛，按其結(jié)構(gòu)特征又可分為各種不同的亞家族，不同亞家族的成員在生物體內(nèi)協(xié)同作用，以正確地調(diào)節(jié)不同基因地表達(dá)。

人們已從酵母、果蠅、鼠及人等多種生物體中分離得到了各種不同類型的鋅指蛋白。C2H2型鋅指蛋白在生物體內(nèi)基因的表達(dá)調(diào)節(jié)過(guò)程中起著十分重要的作用，該類型的鋅指蛋白均含有28-30個(gè)氨基酸長(zhǎng)的保守的指重復(fù)序列：(F/Y)XCXXCXXXFXXXXXLXXHXXXHTGEKP，其中一些特定的氨基酸殘基位點(diǎn)為高度保守的。這一序列在很多不同的鋅指蛋白中均含有多個(gè)拷貝，其拷貝數(shù)不同則功能也不同。[Jeremy?M.Berg，Annu.Rev.Biophys.Chem，1990，19：405-421]。

C2H2型鋅指蛋白按其結(jié)構(gòu)特征還可分成各種不同的家族。Kruppel型鋅指蛋白在生物體內(nèi)即形成了獨(dú)立的家族，該家族的成員均含有鋅指蛋白家族保守的鋅指基序，且各基序間由保守的H/C連接區(qū)域連接在一起，該區(qū)域含有保守的氨基酸序列：TGEKPY/F[Schuh?R.，Aicher?W.Et?al.，Cell，1986，47：1025-1032]。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，該家族中約有三分之一的成員在其N末端還含有一由75個(gè)氨基酸組成的保守基序，并將此基序命名為KRAB(Kruppel-associated?box)結(jié)構(gòu)域。該結(jié)構(gòu)域?yàn)殇\指蛋白N末端與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，在進(jìn)化上高度保守[Judith?F.Margolin?et?al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91：4509-4513]。該結(jié)構(gòu)域又分為A、B兩個(gè)盒結(jié)構(gòu)，其中富含變化的氨基酸殘基，形成兩個(gè)親水性螺旋。鋅指蛋白KRAB亞家族中的成員有些同時(shí)含有KRAB?A-盒及KRAB?B-盒，而有些僅含KRAB?A-盒。研究發(fā)現(xiàn)，KRAB結(jié)構(gòu)域?yàn)橐粷撛诘霓D(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域，其中KRAB?A盒及KRAB?B盒均具有轉(zhuǎn)錄抑制活性，但KRAB?A盒的抑制活性較弱，而KRAB?B盒具有強(qiáng)轉(zhuǎn)錄抑制活性。其中由45個(gè)氨基酸組成的親水性螺旋片段為轉(zhuǎn)錄抑制所必須的，螺旋結(jié)構(gòu)中氨基酸的替換將減弱蛋白對(duì)轉(zhuǎn)錄的抑制功能，從而導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的失調(diào)及引發(fā)各種發(fā)育及惡性紊亂相關(guān)的疾病[N.Tommerup?et?al.，Genomics，1995，27：259-264]。

1995年，Vissing等人從人中克隆得到了一鋅指蛋白KRAB亞家族中的新成員ZNF136，該蛋白的蛋白序列中只含有保守的KRAB?A結(jié)構(gòu)域，其在人體的各種組織中均有表達(dá)，但在體內(nèi)發(fā)揮較弱的轉(zhuǎn)錄抑制活性。其在體內(nèi)主要負(fù)責(zé)參與調(diào)控多種相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，該蛋白的突變或表達(dá)異常將導(dǎo)致相關(guān)蛋白在體內(nèi)的表達(dá)異常，進(jìn)而引發(fā)各種相關(guān)的發(fā)育及代謝紊亂型疾病[Vissing?H.，Meyer?W.K.et?al.，1995，F(xiàn)EBS?Lett，369：153-157]。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人鋅指蛋白的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人鋅指蛋白28.71。

由于如上所述人鋅指蛋白28.71蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人鋅指蛋白28.71蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白28.71蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。