[發明專利]包含皂甙和免疫刺激寡核苷酸的佐劑組合物

有效

• 申請號: 00808836.5
• 申請日: 2000-04-04
• 公開（公告）號: CN1372473A
• 公開（公告）日: 2002-10-02
• 發明（設計）人: M·弗里德;N·加康;P·赫爾曼德
• 申請（專利權）人: 史密絲克萊恩比徹姆生物有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K39/39;A61P31/04;A61P31/12;A61P35/00;A61P37/08;A61P25/28
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 姜建成

本發明涉及用于疫苗的新型佐劑組合物。具體來說，本發明佐劑組合物包含組合的皂甙和免疫刺激寡核苷酸，所述組合還任選包含載體。本發明還提供包含本發明佐劑組合物和至少一種抗原的疫苗。還提供生產本發明佐劑組合物和疫苗的方法及其用作藥物的用途。此外，本發明提供通過胃腸外或粘膜給予本發明疫苗治療疾病易感個體或患病個體的方法。

本領域已知含未甲基化的CpG二核苷酸(“CpG”)的免疫刺激寡核苷酸當通過系統和粘膜途徑給予時用作佐劑(WO?96/02555，EP468520，Davis等，J.Immunol，1998，160(2)：870-876；McCluskie和Davis，J.Immunol.，1998，161(9)：4463-6)。CpG是DNA中存在的胞嘧啶-鳥苷二核苷酸基元的縮寫。從前觀測到BCG的DNA部分能夠發揮抗腫瘤作用。在進一步的研究中，證實得自BCG基因序列的合成寡核苷酸能夠誘導免疫刺激作用(在體外和體內)。這些研究的作者的結論是：某些回文序列，包括中央的CG基元，具有這種免疫刺激活性。后來，Krieg在Nature?374，p546?1995中發表文章闡明了CG基元在免疫刺激中的主要作用。詳細的分析證實，CG基元必須處于一定的序列環境中，而且這種序列是細菌DNA中的常見序列，但是在脊椎動物DNA中非常罕見。免疫刺激序列通常為：嘌呤、嘌呤、C、G、嘧啶、嘧啶；其中所述二核苷酸CG基元是未甲基化CG基元，但是已知其它未甲基化CpG序列是免疫刺激序列而且可用于本發明。

在所述6個核苷酸的某些組合中存在回文序列。在同一個寡核苷酸中可存在若干個這種基元，或者為重復的一個基元或組合的不同基元。含一個或多個這樣的免疫刺激序列的寡核苷酸可激活不同免疫亞組細胞，包括天然殺傷細胞(它產生γ干擾素而且具有裂解細胞活性)和巨噬細胞(Wooldrige等，第89卷(第8期)，1977)。盡管目前證實不具有該共有序列的含其它未甲基化CpG的序列是免疫調節序列。

當CpG配制成疫苗時，一般以自由溶液和自由抗原一起(WO96/02555；McCluskie和Davis，同上)或者與抗原共價結合(PCT公布號WO?98/16247)或者用載體如氫氧化鋁配制后((肝炎表面抗原)Davis等，同上；Brazolot-Millan等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1998，95(26)，15553-8)給予。

在Lacaille-Dubois，M和Wagner?H(1996，關于皂甙的生物和藥理活性的綜述。Phytomedicine第2卷第363-386頁)中介紹了皂甙。皂甙是廣泛分布于植物和海洋動物的類固醇糖苷或三萜烯糖苷。皂甙因為形成膠體水溶液以及沉淀膽固醇而引起人們的注意，所述膠體水溶液振蕩時形成泡沫。當皂甙接近細胞膜時，它們在膜上形成孔樣結構，引起細胞膜破裂。紅細胞溶血就是這種現象的一個實例，它是某些皂甙但是不是所有皂甙的一個特性。

已知皂甙用作系統給予疫苗的佐劑。本領域深入研究了各種皂甙的佐劑活性和溶血活性(Lacaille-Dubois和Wagner，同上)。例如US5,057,540和“皂甙用作疫苗佐劑”，Kensil，C.R.，Crit?Rev?Ther?DrugCarrier?Syst，1996，12(1-2)：1-55和EP?0?362?279?B1介紹了Quil?A(從南美洲的樹Quillaja?Saponaria?Molina樹皮分離制得)及其部分。包含QuilA部分的顆粒結構稱為免疫刺激復合物(ISCOMS)，它具有溶血活性，而且已經將其用于生產疫苗(Morein，B.，EP?0?109?942?B1)。據報道這些結構具有佐劑活性(EP?0?109?942?B1；WO?96/11711)。

溶血性皂甙QS21和QS17(HPLC純化的Quil?A部分)被描述為有效系統佐劑，美國專利號5,057,540和EP?0?362?279?B1公開了其生產方法。這兩種參考文獻還介紹了用作系統疫苗有效佐劑的QS7(Quil-A的非溶血性部分)的作用。Kensil等(1991，J.Immunology第146卷，431-437)還介紹了QS21的作用。QS21和聚山梨酯或環糊精的組合是已知的(WO?99/10008)。WO?96/33739和WO?96/11711介紹了包含部分QuilA如QS21和QS7的顆粒性佐劑系統。