[發(fā)明專利]作為活性物質載體的多瘤病毒蛋白2或3片段

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00806109.2
• 申請日: 2000-04-03
• 公開（公告）號: CN1346366A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發(fā)明（設計）人: W·貝特林;C·雷澤爾;J·瓦爾特
• 申請（專利權）人: 諾凡貝爾分子醫(yī)學股份公司
• 主分類號: C07K14/025
• 分類號: C07K14/025;A61K47/48
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 張廣育,劉玥

本發(fā)明涉及合成的生物活性分子及其制備方法。

Chen，X.S.，Stehle，T.和Harrison，S.C.(1998)：多瘤病毒內部蛋白VP2與主要衣殼蛋白VP1的相互作用和VP2參與病毒進入的含義，EMBO?J.Vol.17，No.12，pp3233-3240描述了負責錨定多瘤病毒的病毒蛋白VP2和VP3至病毒蛋白1的相互作用。根據(jù)該文獻，錨定發(fā)生在VP2或VP3的C末端區(qū)。

US4,950,599公開了多瘤病毒適合將活性物質轉運進細胞中。此外，DE?196?18?797?A1公開了來自多瘤病毒的殼粒適合將分子材料轉運進細胞。

EP?0?259?149?A2公開了使用輪狀病毒內部衣殼蛋白VP6作為免疫載體分子和疫苗，以刺激針對輪狀病毒感染的免疫應答。為此，免疫原性肽通過肽-肽相互作用與VP6結合，該相互作用的細節(jié)未披露。VP6在此并不形成結構殼粒，相反顯示獨特的結構多態(tài)性。VP6以單體或寡聚體形式存在。盡管寡聚體VP6可以形成顆粒，但這些顆粒不是衣殼或殼粒，而是非結構載體蛋白。

Redmond，M.J.等(1991)：輪狀病毒顆粒作為免疫載體，傳遞來自感染物質和內源蛋白的肽，Mol.Immuno.28,269-278介紹了使用輪狀病毒內部衣殼蛋白VP6作為轉運顆粒。為此，VP6通過來自于輪狀病毒蛋白VP4的肽序列的結合蛋白與免疫原性肽或蛋白結合。與來自VP4的肽序列偶聯(lián)的抗原定位于轉運顆粒之外，因此不能受到保護免于降解。

GB?22?57?431?A描述了來自噬菌體MS-2膜蛋白的嵌合蛋白的用途。改蛋白可以形成衣殼。抗原肽或偶聯(lián)于其上的肽與衣殼外部結合。在大腸桿菌中表達時嵌合蛋白的自發(fā)組裝導致被細菌DNA或蛋白污染的高風險。

DE?43?35?025?A1公開了一種內體溶解活性病毒樣顆粒，其已用膜活性肽在其外表面上修飾過。所述顆粒的制備復雜。

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的缺陷。具體說，本發(fā)明意在方便地提供一種與多瘤病毒VP1特異性結合的活性物質。

該目的通過權利要求1、9和19的特征達到。合適的實施方案可由權利要求2到8、10到18和20到24的特征產(chǎn)生。

本說明書使用以下定義：

衍生氨基酸序列：與其來源氨基酸序列相比沒有改變或有氨基酸交換、插入或缺失的氨基酸序列。

C末端：在C末端的區(qū)域。

合成分子：人工制備分子。

偶聯(lián)或附著：共價或非共價結合。非共價結合可以通過例如螯合結合實現(xiàn)。

遺傳工程：包括將限定核酸導入細胞中的方法的技術。

本發(fā)明提供一種合成的生物活性分子，其中衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列與活性物質連接。

設想的合成生物活性分子使其可以以簡單方式將活性物質與多瘤病毒VP1特異性締合。這導致結構殼粒的形成。使用該殼粒可以以簡單方式制備作為活性物質通用載體的衣殼。

有利地是，氨基酸序列(A1)包括10到55，優(yōu)選28到38個氨基酸。限定到相對較短的氨基酸序列降低了制備合成生物活性分子的費用并簡化了其制備過程。

有利地是，該氨基酸序列至少在某些區(qū)段相應于以下VP2序列：氨基酸250到319，優(yōu)選氨基酸260到300，特別優(yōu)選氨基酸287到297。所述氨基酸序列確保了對VP1的錨定。

在合成生物活性分子中，優(yōu)選氨基酸序列(A1)具有以下序列：

Trp?Met?Leu?Pro?Leu?Ile?Leu?Gly?Leu?Tyr?Gly

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優(yōu)選活性物質與氨基酸序列(A1)通過接頭結合。該接頭可以由至少一個氨基酸，一種肽、蛋白、脂質等組成。活性物質可以選自以下：核酸、寡核苷酸、蛋白、肽、肽類物質、PNA、所述物質的修飾形式和低分子量藥物活性物質。特別合適的是通過以下所述反應基團之一與氨基酸序列偶聯(lián)的活性物質。

合成生物活性分子可以是偶聯(lián)于多瘤病毒VP1衍生氨基酸序列和/或是一種藥物的成分。

本發(fā)明另一方面提供一種制備本發(fā)明的合成生物活性分子的方法，該方法具有以下步驟：

a)提供衍生自多瘤病毒病毒蛋白2(VP2)或3(VP3)C末端的氨基酸序列(A1)，該氨基酸序列(A1)具有偶聯(lián)劑，并且

b)將活性物質與氨基酸序列(A1)通過偶聯(lián)劑結合。