[發(fā)明專利]一種新的多肽——核孔復(fù)合體10.67和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00127658.1
• 申請日: 2000-12-01
• 公開（公告）號: CN1355194A
• 公開（公告）日: 2002-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué);上海博道基因技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 陸飛,姚靜芳

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——核孔復(fù)合體10.67，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

在真核細(xì)胞中，核質(zhì)之間存在著連續(xù)而有選擇性的雙向物質(zhì)交換，核孔復(fù)合體(NPC)是一種特殊的跨膜運(yùn)輸?shù)鞍讖?fù)合體，構(gòu)成核質(zhì)間雙向運(yùn)輸?shù)挠H水性通道，包括兩種運(yùn)輸方式，被動擴(kuò)散和主動運(yùn)輸。核孔復(fù)合體主要由蛋白質(zhì)組成，含有N-連接糖蛋白，起到穩(wěn)定復(fù)合體結(jié)構(gòu)的功能；還存在至少8-10種O-連接糖蛋白，構(gòu)成了核孔蛋白家族(nucleoporin)，它們能夠與麥胚凝集素(WGA)強(qiáng)烈親合，它們背向核周隙，直接暴露于胞質(zhì)和核質(zhì)，可能這類糖蛋白即構(gòu)成胞質(zhì)和核質(zhì)絲狀物，直接參與核質(zhì)物質(zhì)交換。根據(jù)免疫交叉反應(yīng)的事實(shí)，表明從酵母到人核孔蛋白有很強(qiáng)的同源性，核孔復(fù)合體整個結(jié)構(gòu)在進(jìn)化上是高度保守的。四種哺乳動物O-連接蛋白，遷移率分別為62、58、54、45KD，構(gòu)成了p62復(fù)合體(Finlay?et?al.，1991；Kita?et?al.，1993)。核孔復(fù)合體的整個結(jié)構(gòu)在進(jìn)化上是高度保守的。

核孔復(fù)合體的功能主要是核質(zhì)物質(zhì)的交換，它是核質(zhì)物質(zhì)交換的雙向選擇性親水通道。在真核細(xì)胞中，核質(zhì)之間存在著連續(xù)而有選擇性的雙向物質(zhì)交換，核孔復(fù)合體在功能上可被看作是一種特殊的跨膜運(yùn)輸?shù)鞍讖?fù)合體，構(gòu)成核質(zhì)間雙向運(yùn)輸?shù)挠H水性通道。其運(yùn)輸方式主要有2種：被動擴(kuò)散與主動運(yùn)輸。

hunp153蛋白是位于核孔復(fù)合體中的一種蛋白，包含了3個明顯的區(qū)域。hunp153蛋白接近羧基末端區(qū)域與其它的核孔蛋白非常相似，與鼠的p62蛋白有23％的序列相似性，該區(qū)域包含了25拷貝的XFXFG五肽重復(fù)序列，富含Ser和Thr，占了氨基酸殘基總數(shù)的32％。對于鼠的p62的研究發(fā)現(xiàn)，該分子區(qū)域包含了附加的O連接N-乙酰氨基葡糖殘基位點(diǎn)。靠近氨基末端的區(qū)域包含7個附加的五肽重復(fù)序列。多肽的中間區(qū)域包含了4個重復(fù)序列，均為37-38個氨基酸殘基數(shù)，每一個重復(fù)序列有2對Cys殘基(CXXCXXXXXXXXXXcXXC)，該段序列非常接近于某些核酸結(jié)合蛋白的鋅指結(jié)構(gòu)域(Berg，J.M.，1986)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質(zhì)瘤中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與核孔復(fù)合體的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為核孔復(fù)合體10.67。

由于如上所述核孔復(fù)合體10.67蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的核孔復(fù)合體10.67蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新核孔復(fù)合體10.67蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽——核孔復(fù)合體10.67以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼核孔復(fù)合體10.67的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼核孔復(fù)合體10.67的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)核孔復(fù)合體10.67的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽——核孔復(fù)合體10.67的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽——核孔復(fù)合體10.67的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與核孔復(fù)合體10.67異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO：1中223-516位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO：1中1-1021位的序列。