[發明專利]一種新的多肽——鋅指蛋白9.46和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00127128.8
• 申請日: 2000-11-02
• 公開（公告）號: CN1351996A
• 公開（公告）日: 2002-06-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——鋅指蛋白9.46，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鋅結合蛋白通常作為轉錄因子及信號轉導分子參與基因的表達與調控，這類蛋白構成了一個很大的蛋白家族，被稱為鋅指蛋白。一個鋅原子結合結構域通常由25到30個氨基酸殘基組成，這些氨基酸殘基組成了一個或多個原子結合位點。鋅原子的結合使蛋白折疊成一定的結構單位，這些結構能很好的適應大分子間的相互作用(Berg，J.M.et?al.，1996，Science，271：1081-1085)。研究發現，鋅指蛋白在不同的生物的各種組織中均有表達，這些組織包括造血細胞、腦、神經系統、各種與腫瘤相關的組織和無限增殖細胞系組織等。其在這些組織的基因表達過程中均起著極為重要的調節作用。

所有的鋅指蛋白均含有保守的鋅指結構，鋅指結構主要有兩類：C2H2型及C2C2型，此外，還有一類鋅指結構在酵母的基因活化因子發現的，2個Zn原子緊密靠在一起與6個Cys配合，形成一個“鋅簇”核心的結構。其中以C2H2型分布最為廣泛。

C2H2型鋅指結構域，即Zn原子與2個Cys、2個His殘基結合(C2H2)，在這類鋅指單元中有一段相對較為保守的序列：(Tyr，Phe)-X-Cys-X(2，4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3，5)-His(其中X表示任意氨基酸殘基；半胱氨酸與組氨酸與鋅原子形成配位鍵，結合鋅原子；其它三個保守的氨基酸殘基形成疏水性中心區域；其它變化的氨基酸殘基負責介導蛋白與其它的分子的相互作用)。在鋅指蛋白中，Zn的作用是使蛋白質分子形成指型構象的骨架與DNA結合。鋅指結構在許多與“蛋白-核酸”和“蛋白-蛋白”相互作用有關的蛋白里都存在。一個鋅指蛋白可能含有一個或多個鋅指結構域，這些結構域在生物體內獨立完成自己的功能。在很多情況下，含有鋅指結構域的蛋白與特殊的雙鏈及單鏈DNA序列相互作用，起著轉錄調節因子及信號傳遞因子的作用。現有研究發現，C2H2類型的鋅指結構域不僅在一些組織的基因表達過程中起重要的調節作用，且其在發育調節及一些組織腫瘤的形成過程中也起著關鍵的作用。

C2H2型鋅指蛋白按其結構特征還可分成各種不同的家族。Kruppel型鋅指蛋白在生物體內即形成了獨立的家族，該家族的成員均含有鋅指蛋白家族保守的鋅指基序，且各基序間由保守的H/C連接區域連接在一起，該區域含有保守的氨基酸序列：TGEKPY/F[Schuh?R.，Aicher?W.Et?al.，Cell，1986，47：1025-1032]。此外，Bellefroid等人于1991年就指出，該家族中約有三分之一的成員在其N末端還含有一由75個氨基酸組成的保守基序，并將此基序命名為KRAB(Kruppel-associated?box)結構域。該結構域為鋅指蛋白N末端與DNA結合的結構域，在進化上高度保守[Judith?F.Margolin?et?al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91：4509-4513]。該結構域被分為A、B兩個盒結構，其中富含變化的氨基酸殘基，形成兩個親水性螺旋。鋅指蛋白KRAB亞家族中的成員有些同時含有KRAB?A-盒及KRAB?B-盒，而有些僅含KRAB?A-盒。研究發現，KRAB結構域為一潛在的轉錄抑制結構域，其中由45個氨基酸組成的親水性螺旋片段為轉錄抑制所必須的，螺旋結構中氨基酸的替換將減弱蛋白對轉錄的抑制功能，從而導致基因轉錄表達的失調及引發各種發育及惡性紊亂相關的疾病[N.Tommerup?et?al.，Genomics，1995，27：259-264]。同時，KRAB結構域與第一個鋅指結構間也含有一保守的連接區域，該區域至少含有一個核酸定位信號，該信號與蛋白的正確定位及發揮功能有關。

通過基因芯片的分析發現，在正常腦、肝癌、肌肉、胎腦、胎腎，胎肺、胎肝、甲狀腺、胸腺、成人肝、肺、膠質瘤中，本發明的多肽的表達譜與鋅指蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為鋅指蛋白9.46。

由于如上所述鋅指蛋白9.46蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的鋅指蛋白9.46蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新鋅指蛋白9.46蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。