[發明專利]一種新的多肽——人的線粒體翻譯起始因子IF－2mt35.97和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125819.2
• 申請日: 2000-10-26
• 公開（公告）號: CN1351056A
• 公開（公告）日: 2002-05-29
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P3/10;A61P9/10;A61P27/12;A61P31/00
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在原核生物和真核生物的細胞中，蛋白質的生物合成的起始已經被廣泛的研究過。在起始過程中，在依賴GTP的行為中，起始因子2(IF-2)促進起始因子tRNA同小的核糖體亞基的結合。原核生物的IF-2是一個分子量為78000-97000的單多肽鏈。在依賴mRNA的行為中，它促進FMet-tRNA結合30S的核糖體亞基。真核生物的IF-2是一個分子量為145000的三聚體蛋白(Pain，V.M，1986，Biochem.J.235，625-637)。它負責Met-tRNA結合40S亞基。

最近我們發現了一個新的人的線粒體翻譯起始因子2(IF-2mt)。它的mRNA含有一個270個堿基對的5′未翻譯前導序列。它含有三個ATG三聯體，都是位于框外，它同IF-2mt起始密碼子相關。每一個ATG標記短的上游開放閱讀框架(uORF)的開始。實驗表明，uORF強烈的抑制蛋白質編碼序列的上游的翻譯(Hinnebusch，a.g.，1990，Trends?Biochem.Sci.15，148-152)，IF-2mt開放閱讀框架的翻譯被這些uORF的存在而下調。它有一個2181個堿基對的開放閱讀框架，編碼727個氨基酸蛋白。IF-2mt的翻譯起始密碼子是AUG。它還含有一個超過60個殘基的聚酰胺信號。

大多數的線粒體蛋白質在細胞質中是以前體的形式被合成的。大多數的前體攜帶氨基末端的前序列，它含有定位于線粒體中的信息。線粒體蛋白的前序列富含帶正電的殘基，缺乏酸性殘基，大多數含有羥基化殘基。從氨基末端開始的人的肝的IF-2mt?30個氨基酸含有基礎性的殘基，包括兩個亮氨酸，四個精氨酸，兩個羥基氨酸。

實驗表明，人的IF-2mt的成熟形式的多肽序列同2/3的原核生物的IF-2s的羧基末端有廣泛的同源性。存在IF-2的G區域中的選擇性的β平板/α螺旋二級結構保留在IF-2的中心區域。在進化過程中，IF-2的G區域是高度保守的。

在心臟，肝臟，骨骼肌肉和腎臟中都有豐富的IF-2mt的轉錄水平，同時在腦，前列腺，脾臟，肺有低水平的IF-2mtmRNA。

人的IF-2mt同蛋白質的翻譯的起始有關，如果表達異常或突變，將影響蛋白的翻譯，最終影響蛋白質的合成，從而導致相關性疾病的發生。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％?FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97。

由于如上所述人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人的線粒體翻譯起始因子IF-2mt?35.97異常相關的疾病的方法。