[發明專利]一種新的多肽——人鋅指蛋白96－28.71和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125593.2
• 申請日: 2000-09-29
• 公開（公告）號: CN1345867A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P1/04;A61P3/10;A61P9/06;A61P15/00;A61P25/08;A61P43/00
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人鋅指蛋白96-28.71，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

鋅指結構域是核酸結合蛋白的結構，在許多核酸結合蛋白中發現含有該結構域，這些蛋白是DNA轉錄過程的調控因子。一個鋅指結構域由25至30個氨基酸殘基構成。C2H2鋅指是典型的鋅指結構域。其中兩個保守的半胱氨酸及組氨酸都位于結構域的端部，與一個鋅離子配位，其保守的序列模板為：#-X-C-X(1-5)-C-X3-#-X5-#-X2-H-X(3-6)-[H/C]，X代表任何氨基酸殘基，#-代表那些對于鋅指穩定折疊較為重要的殘基。C2H2鋅指由兩條短的β鏈后接一個α螺旋構成。螺旋的N-端部分與結合鋅指的DNA主溝結合。這樣一個結構域約和5個核苷酸相互作用。人體內有多種不同的C2H2型鋅指蛋白，它們的序列是高度同源的，它們與DNA的特異性結合主要是位于α-螺旋中幾個有限的位點間的區別(Bellefgoid?et?al.，DNA?8(6)，377^-387(1989))。

另一種鋅指蛋白為C2C2型，其中鋅離子與四個半胱氨酸殘基形成配位鍵。在這類蛋白中，如以H2代替C2，則失去了與DNA的結合能力。所有的C2C2型鋅指蛋白中的鋅指結構盡管對于DNA結合是必需的，但對結合的專一性并不重要。因而負責識別專一性的氨基酸序列必定存在于其他部位(Berg，J.M.(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.85：99^-102)。

在人體胎盤中發現有100多種與Kruppel蛋白有關的鋅指蛋白。Kruppel型鋅指蛋白由10個鋅指特征序列模板構成，在有些形式的細胞中限制性表達，其中高度保守的TGEKP序列是此類蛋白的特征序列模板。Kr鋅指蛋白的指環形成一個含有賴氨酸-賴氨酸環的β-折疊域，后面跟隨兩親性的α螺旋域，位于親水面的殘基與DNA特異性作用。Kr鋅指蛋白所含的KRAB域(或是Kruppe1-有關盒)存在于三分之一的C2H2型鋅指蛋白中。KRAB域參與蛋白與蛋白間的反應，是鋅指蛋白的轉錄阻抑域(Friedman?JR，Fredericks?WJ，Genes?Dev1996；10：2067-2078)。KRAB域通常由兩個外顯子編碼，由這兩個外顯子編碼的區域分別被稱為KRAB-A及KRAB-B域。具有保守的KRAB域的鋅指蛋白在分化，腫瘤發生以及信號傳導方面起著重要作用。

本發明的多肽與人Kruppel型鋅指蛋白在蛋白水平上有66％的同一性及79％的相似性，含有各種特征性序列片段，且具有相似的生物學功能，其分子量為96，因而被命名為人鋅指蛋白96。該多肽及其抑制劑??拮抗劑??激動劑可用于診斷

防治與轉錄因子突變有關的癌腫或疾病，例如早幼粒細胞白血病，彌散性大細胞淋巴瘤等。

由于如上所述人鋅指蛋白96-28.71蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人鋅指蛋白96-28.71蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人鋅指蛋白96-28.71蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人鋅指蛋白96-28.71以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白96-28.71的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人鋅指蛋白96-28.71的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人鋅指蛋白96-28.71的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人鋅指蛋白96-28.71的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人鋅指蛋白96-28.71的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人鋅指蛋白96-28.71異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：