[發明專利]一種新的多肽——人蛋白水解酶調節蛋白11.22和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00125320.4
• 申請日: 2000-09-22
• 公開（公告）號: CN1345778A
• 公開（公告）日: 2002-04-24
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P43/00
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——人蛋白水解酶調節蛋白11.22，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

大腸桿菌可被專性寄生物，一種雙鏈DNA病毒，λ噬菌體侵染。λ噬菌體是一種溫和噬菌體，可在大腸桿菌中以兩種狀態增殖。一種為裂解狀態，噬菌體DNA自主復制并指引衣殼蛋白的形成??包裝以及宿主細胞溶原。另一種為溶原狀態，λDNA整合至宿主細胞基因組并被復制。溶原狀態的噬菌體被稱為原噬菌體；宿主被稱為溶原體，并被認為是免疫的。

調控蛋白質活性的一種方法是通過控制其穩定性。這可通過控制特定蛋白水解酶表達或是合成特異性抑制這些蛋白水解酶的蛋白而完成。在λ噬菌體的溶原化過程中，CIII蛋白，一種小型的噬菌體編碼的多肽，作為正因子。在細胞中該蛋白的存在使得CII轉錄激活因子，一種通常極不穩定，半衰期為1-2分鐘的蛋白穩定，此后穩定的CII蛋白能夠激活CI，一種編碼阻礙發育所需的蛋白轉錄的阻抑蛋白基因，從而啟動溶原的建立。λCIII蛋白增加了各種表達不同CII蛋白的λ噬菌體的溶原性。此外，CIII的過度產生可能通過固定RNA聚合酶，σ³²的熱激特異亞基而誘導熱激反應。CIII通過與被穩定的蛋白結合或是與這些蛋白的特異細胞蛋白水解酶結合而直接抑制蛋白水解酶。不同λ噬菌體中的CIII蛋白的中心部分是序列最為相似的區域，并且對該蛋白的活性是必須且充分的。我們以這22個殘基序列作為一特征序列模板：E-S-x-L-x-R-x(2)-[KR]-x-L-x(4)-[KR](2)-x(2)-[DE]-x-L。其結構為兩親性的α-螺旋，該螺旋中的親水性部分含有大部分堿性殘基，這是結合RNA及DNA的蛋白的特征。因而，CIII本身可能是一種基因表達調節子，參與調控負責降解CII及σ³²蛋白的宿主基因，而CIII的保守螺旋域被認為是調節蛋白水解酶以及降解CII及σ³²蛋白的活性位點，故此認為CIII作為那些蛋白水解酶的競爭性抑制劑發揮效用。

通過基因芯片的分析發現，在胎腦、原液培養的L02細胞株、0.5％FBS培養液37.C饑餓的L02細胞株、胎腎、直腸癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睪丸、胎胃、成人胃中，本發明的多肽的表達譜與人蛋白水解酶調節蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人蛋白水解酶調節蛋白11.22。

由于如上所述人蛋白水解酶調節蛋白11.22蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人蛋白水解酶調節蛋白11.22蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人蛋白水解酶調節蛋白11.22蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——人蛋白水解酶調節蛋白11.22以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蛋白水解酶調節蛋白11.22的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人蛋白水解酶調節蛋白11.22的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人蛋白水解酶調節蛋白11.22的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——人蛋白水解酶調節蛋白11.22的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——人蛋白水解酶調節蛋白11.22的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人蛋白水解酶調節蛋白11.22異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。