[發(fā)明專利]凍干的甲肝疫苗制造工藝

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00120743.1
• 申請(qǐng)日: 2000-07-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1334123A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高正倫;魏巍;于蘭;周妍;高俊芳;胡曉晨;趙克儉;徐昆;張晶;韋兆華;張立志;郭健;王云霞;仲宇航;霍忠臣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)春長(zhǎng)生實(shí)業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): A61K39/29
• 分類號(hào): A61K39/29;A61P1/16
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明是一種甲肝疫苗原液的處理技術(shù)，用以制造凍干的甲型肝炎減毒活疫苗。

甲型肝炎病毒是小RNA腸道病毒，由它感染引起的甲型肝炎是世界性傳染病，能引發(fā)大范圍流行，威脅人們的健康。目前控制流行的有效措施在于使用疫苗。

1986年美國(guó)MERCK公司provost等人獲得甲肝病毒F＇減毒株，我國(guó)從80年代初開(kāi)始，用人工誘導(dǎo)方法減毒，選育出疫苗株，其中以L-A-1株和H₂株作為毒種制造的甲型肝炎減毒活疫苗于1992年獲試生產(chǎn)文號(hào)，已生產(chǎn)了上千萬(wàn)人份疫苗，經(jīng)大量人群接種觀察證明該疫苗安全，有效。

國(guó)產(chǎn)的甲型肝炎減毒活疫苗是以人胚肺二倍體細(xì)胞為甲肝病毒繁殖基質(zhì)，接種毒種，在32-36℃條件下培育3-4周，之后收獲感染的細(xì)胞，并經(jīng)凍融，超聲波處理，通過(guò)各項(xiàng)檢定即為疫苗成品。這種液體劑型的活疫苗不穩(wěn)定效期短，需冷鏈運(yùn)輸與保存。在中國(guó)，尤其是在廣大偏遠(yuǎn)農(nóng)村地區(qū)接種，長(zhǎng)途運(yùn)輸成本高，增加了人們負(fù)擔(dān)。另外，疫苗效期短易造成制品過(guò)期浪費(fèi)。因此，如果將甲肝疫苗制成凍干劑型，就會(huì)延長(zhǎng)效期，解決冷鏈運(yùn)輸?shù)膯?wèn)題。

早在1998年，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠家就開(kāi)始著手研制凍干苗，技術(shù)上的難點(diǎn)在于以人胚肺二倍體細(xì)胞作為甲肝病毒繁殖基質(zhì)培養(yǎng)制造的活疫苗，直接加入凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干，制品的水份升華受阻，不易成型，達(dá)不到保護(hù)病毒的目的。

本發(fā)明提供的原液處理技術(shù)，實(shí)現(xiàn)的凍干成型，能有效地保護(hù)病毒抗原。

技術(shù)方案是在收獲的疫苗原液中加入三氯甲烷，振搖使之充分溶解，經(jīng)超濾洗滌，收集制成病毒懸液，加入保護(hù)劑，同時(shí)添加微量三氯甲烷，灌裝西林瓶，半壓塞裝箱凍干，經(jīng)檢定合格后，即為凍干的疫苗產(chǎn)品。

本發(fā)明具體工藝方法為：

1.在長(zhǎng)成單層的人胚肺二倍體細(xì)胞中，接種L-A-1株或H₂株毒種，32-362培養(yǎng)3-4周，之后收獲感染的細(xì)胞懸液(又稱疫苗原液)。

2.懸液合并后，在其中加入2％-10％的三氯甲烷，振蕩使三氯甲烷充分溶解。三氯甲烷最佳使用量為6‰。

3.在孔徑為100KD的超濾膜上進(jìn)行全超濾，最終使分子量大于100KD的微粒沉積于膜表面。

4.使用Earle’s或其他緩沖液pH6.5-7.5沖洗膜包上沉積物，洗液液量為疫苗原液的3-6倍。

5.洗滌后，配制199疫苗液或磷酸緩沖液pH7.0-7.3收集沉積于膜上病毒微粒。

6.在收集到的懸液中加入凍干保護(hù)劑同時(shí)添加0.25-3‰的三氯甲烷，振蕩使之溶解，三氯甲烷最佳使用量為2‰。

7.之后灌裝西林瓶，每支0.5-1ml，半壓塞裝箱凍干，-35℃以下凍結(jié)3-4hr，開(kāi)始干燥，制品在-20℃以下升華，待成形后，升溫至28℃，控溫7-9hr，凍干結(jié)束。

8.經(jīng)檢定合格即為凍干疫苗產(chǎn)品。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極效果：

采用本發(fā)明的技術(shù)方案，能將以人胚肺二倍體細(xì)胞為基質(zhì)制造的疫苗原液凍干成型，能有效保護(hù)病毒抗原，而工藝簡(jiǎn)單高效。在制品中添加的三氯甲烷，在洗滌和升華階段已徹底除去(按《中國(guó)生物制品規(guī)程》(一部)(1995年版)中的方法測(cè)定)制品中不殘留有機(jī)溶劑三氯甲烷。

實(shí)施例：

用胰酶(0.125％)消化細(xì)胞培養(yǎng)瓶上的感染細(xì)胞，加入100-250ml疫苗液或緩沖液，制成懸液，將懸液合并于3L鋼瓶中，按合并的體積量加入6‰的三氯甲烷(A.R.)，然后將鋼瓶放置在搖床上振蕩20-40分鐘或凍融1-2次，使三氯甲烷充分溶解。合并3L瓶中疫苗液于10L玻璃瓶中進(jìn)行超濾(超濾器上裝有100KD的膜包)。再以Earle’s或其他緩沖液pH6.0-7.5循環(huán)沖洗膜包，棄洗液，用1?99疫苗液收集膜上沉積的病毒顆粒，制成懸液。再加入保護(hù)劑[保護(hù)劑成份參見(jiàn)專利(申請(qǐng)?zhí)枺?8117802.2)]，同時(shí)添加2‰的三氯甲烷振蕩使之溶解。灌裝西林瓶，半壓塞裝箱凍干，預(yù)凍時(shí)間3-4hr，升華成型后，控溫至28℃，7-9hr，凍干結(jié)束，包裝后即為產(chǎn)品。