[發明專利]一種新的多肽——mRNA(鳥嘌呤－7－)甲基轉移酶40.04和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00117056.2
• 申請日: 2000-07-07
• 公開（公告）號: CN1333356A
• 公開（公告）日: 2002-01-30
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/48;C12Q1/68;A61K38/45
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

絕大多數真核生物細胞的mRNA包含有5’帽子結構m⁷G(5’)pppN，在那兒7-甲基轉移酶殘基通過一個5’-5’三硫酸橋鍵連接到次末端核苷的5’位置(Shatkin，A.J.，1976；Banerjee，A.K.，1980)。在基因表達的不同步驟上帽子結構都起著重要的作用，包括翻譯的起始(Filipowicz，W.，1978)、RNA的剪切(Konarska，M.，M.，Padgett，R.A.，and?Sharp，P.A.，1984；Izaurralde，E.，Lewis，J.et?al.，1994)、從細胞核到細胞質的mRNA轉運(Izaurralde，E.，Lewis，J.etal.，1994)以及mRNA的翻轉(Caponigro，G.，and?Parker，R.，1996)。新合成RNA的帽子結構通過一系列的步驟形成，第一步是5’三磷酸尾部γ-磷酸的移去，形成二磷酸尾巴，然后mRNA鳥嘌呤轉移酶將GTP的GMP部分轉移到5’-二磷酸尾部，接著mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶將甲基基團從S腺苷甲硫氨酸(AdoMet)轉移到鳥嘌呤N7位置，成為一個帽子結構。

mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶催化了鳥嘌呤N7位置上GpppN的甲基化，該酶存在三種不同形式的cDNA，分別為hCMT1a、hMCT1b、hMCT1c。hCMT1a和hMCT1b分別編碼長為476和504個氨基酸殘基的蛋白，它們之間的區別只存在于酶第465個殘基之后的C末端位置區域，hCMT1c與hCMT1a編碼相同的多肽，但其3’非編碼區域包含了hCMT1b的部分C末端序列和非編碼區域序列，因此它是hCMT1a、hMCT1b的嵌合體。hCMT1的N末端區域富含親水性氨基酸，還含有4個核定位信號(NLS)。NLS富含基礎氨基酸，在197個殘基中占了57個。RT-PCR分析顯示，三種形式的mRNA表達非常廣泛，遍布于人類幾乎所有的組織和器官中，包括大腦、小腦、甲狀腺、心臟、肝、胰腺、大腸、腎、睪丸、肌肉和皮膚等。

除了催化了鳥嘌呤N7位置上GpppN的甲基化，在體外，mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶還能夠直接結合到磷酸化形式的RNA聚合酶II大亞基羧基末端(CTD)，但是在體內，它以直接的還是間接的(即依靠其它的蛋白)形式與CTD結合還有待進一步的證明。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌中，本發明的多肽的表達譜與mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04。

由于如上所述mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽——mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——mRNA(鳥嘌呤-7-)甲基轉移酶40.04的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。