[發明專利]一種新的多肽——四次跨膜蛋白14.19和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00117025.2
• 申請日: 2000-07-07
• 公開（公告）號: CN1333214A
• 公開（公告）日: 2002-01-30
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——四次跨膜蛋白14.19，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

四次跨膜蛋白超家族(TM4SF)是一族古老的蛋白質，已知的該超家族成員有：CD9、CD37、CD53、CD63、CD81、CD82、CD151、Co-029、NAG-2和Ta11a-1。該蛋白存在四個跨膜的結構域，這四個結構域定位于兩個非對稱的細胞外區域。這些分子有一個彼此相似的重要序列，它們中的一些在跨膜結構域2和3之間還有一信號序列。全部有核細胞都表達一系列四次跨膜蛋白，其中，CD9、CD63、CD82基因的表達產物與一些癌癥的轉移呈負相關，它們在這些腫瘤細胞中作為轉移的抑制子而減少轉移的發生，該效應與大分子復合物包含的四次跨膜蛋白有關，而該大分子復合物亦包含如B1整合蛋白、淋巴細胞抗原CD4、CD8、CD19等的非四次跨膜蛋白分子。四次跨膜蛋白與特異蛋白伴侶結合，通過彼此之間的相互作用而相互聯系，它們在一些細胞表面分子的相互聯系及許多細胞功能的結合中有重要作用。

2000年Todd?et?al.等人克隆出該基因超家族的新成員——NET-x基因(x為1-7)，其產物約有200-300個氨基酸組成。這七個基因分子各有四個長度足以橫跨細胞質膜的疏水區域，前兩個跨膜結構域之間包含14-29個氨基酸，而第2、3個跨膜結構域之間的親水部分十分短，僅有不超過5個氨基酸。該蛋白的跨膜結構域所定位的第二個細胞外區域的長度變化很大，但NET蛋白分子長度較穩定，如NET-6有68個氨基酸，而NET-2有109個氨基酸。所有NET在第二個細胞外區域至少有4個半胱氨酸(其中3個在保守位點)，全部NET在第三或第四個跨膜結構域中都包含帶電殘基，除NET-7外的其它NET的第一個跨膜結構域含有天冬氨酸。除了NET-2，其它NET在第一個跨膜結構域之后都含有保守的賴氨酸，而NET-2則由天冬氨酸替代賴氨酸。除了NET-2，其它NET都有胞外結構域的糖基化，而僅NET-4在第一個胞外區域含一功能區。NET-3與CD9有48％的一致性，NET-5與NAG-2有55％的一致性，而與CD53有41％的一致性，其它NET與已知的四次跨膜蛋白有12-25％不等的一致性。NET-1僅在上皮細胞中表達；NET-2基因含有8個外顯子，5個內含子/外顯子的交界在所有四次跨膜蛋白中均保守；NET-3具有表達的限制模式，它僅存在于A431、LoVo及造血細胞中；NET-4在所有T淋巴細胞中表達，而在大多數B淋巴細胞中不表達；NET-7缺乏5′端序列，但它仍足以編碼一完整的四次跨膜蛋白。[Biochim?Biophys?Acta?2000?Mar16；1478(1)：159-63]

跨膜蛋白廣泛分布于生物體各個組織細胞，在物質運輸等方面具有十分重要的作用，近年研究表明它還與一些腫瘤細胞的轉移抑制有關。若發生表達異常，將嚴重破壞細胞的正常生命活動及正常功能。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與四次跨膜蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為四次跨膜蛋白14.19。

由于如上所述四次跨膜蛋白14.19蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的四次跨膜蛋白14.19蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新四次跨膜蛋白14.19蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——四次跨膜蛋白14.19以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼四次跨膜蛋白14.19的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼四次跨膜蛋白14.19的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產四次跨膜蛋白14.19的方法。