[發(fā)明專利]一種新的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00116460.0
• 申請日: 2000-06-12
• 公開（公告）號: CN1328000A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定到細(xì)胞膜表面。不論在原生動物還是在哺乳動物中，GPI的核心結(jié)構(gòu)是保守的(Thomas，J.R.，Dwek，R.A.，andRademacher，T.W.，1990；Cross，G.A.，1990)。許多蛋白如糖基轉(zhuǎn)移酶等是GPI錨定器的生物合成所必不可少的，人類細(xì)胞中的糖基磷脂酰肌醇聚糖F(PIG-F)也是其中之一。

PIG-F的全長cDNA含有一個(gè)917堿基的開放閱讀框，編碼一條219個(gè)氨基酸殘基的蛋白。PIG-F的5’非翻譯區(qū)域含有一個(gè)典型的翻譯起始一致性序列(Kozak，M.，1987)，但是其信號肽沒有典型的N末端疏水性序列。根據(jù)PIG-F的氨基酸序列可以推斷，該蛋白是非常疏水性的(包含了多于55％的疏水性殘基)，因此其大多數(shù)氨基酸殘基都包埋在細(xì)胞膜的內(nèi)部。

由于其cDNA中沒有任何的DNA結(jié)合區(qū)域發(fā)現(xiàn)，推斷PIG-F可能直接參與GPI錨定器的生物合成過程，并且在七最后一個(gè)步驟中起作用。它還可能有乙醇胺磷酸酯(EthN-P)轉(zhuǎn)移酶活性，能夠催化乙醇胺磷酸酯向GPI中間態(tài)(存在三個(gè)甘露醇?xì)埢?的轉(zhuǎn)移。另外，PIG-F還與烷化的磷脂酰肌醇(PI)的生物合成密切相關(guān)。

在人類造血細(xì)胞中，GPI錨定器生物合成的缺乏將導(dǎo)致一種溶血性疾病——陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿(PNH)(Mahoney，J.F.，Urakaze，M.et?al，1992；Takahashi，M.，Takeda，J.et?al.，1993)。實(shí)驗(yàn)證明，參與GPI錨定器生物合成早期過程的糖基磷脂酰肌醇聚糖A(PIG-A)(Miyata，T.，Takeda，J.，etal.，1993)的缺失就是造成PNH疾病的原因之一。事實(shí)上，GPI錨定器生物合成過程中任何一個(gè)步驟的缺失都將導(dǎo)致PNH疾病的發(fā)生，PIG-F當(dāng)然也不例外(Inoue?N，Kinoshita?T，OriiT，Takeda?J，1993)。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1O13HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與糖基磷脂酰肌醇聚糖F的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22。

由于如上所述糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對本發(fā)明的多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對本發(fā)明多肽——糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與糖基磷脂酰肌醇聚糖F11.22異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO：2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：