[發明專利]一種新的多肽——DNA拓撲異構酶Ⅱ－beta(TOP2B)10.34和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00116443.0
• 申請日: 2000-06-12
• 公開（公告）號: CN1328154A
• 公開（公告）日: 2001-12-26
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/61
• 分類號: C12N15/61;C12N9/90;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/533;C12Q1/68;A61K38/52
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽——DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

染色體的濃縮、染色單體的分開有著非常重要的作用，還能夠釋放由于DNA轉錄和復制而產生的扭轉應力(Roca，1995)。II型拓撲異構酶的催化活性包括該酶與雙鏈DNA的共價結合，并且伴隨著DNA卵裂形成一個瞬時裂開的混合物。然后這種酶能夠結合ATP，使之構象發生改變以便于一個二級DNA雙螺旋穿過開裂著的混合物。緊接著發生ATP的水解和DNA拓撲結構的重新封閉。

在鳥類和哺乳動物細胞內，存在兩種異構形式的拓撲異構酶，分別是topo?IIα(TOP2A)和topo?IIβ(TOP2B)(Chung?et?al.，1989)。而在非脊椎動物細胞內，只有單一形式的拓撲異構酶。TOP2A位于染色體17q21-22，TOP2B位于染色體3p24(Tsai-Pflugfelder?et?al.，1988；Jenkins?et?al.，1992)。兩種異構體在真核的有機體中高的進化程度表明了它們發揮著各不相同的生理學功能，它們在一些生物化學和藥理學特性上有所不同(Mirski?and?Cole，1997；Austinand?Marsh，1998)。它們的表達水平在不同的組織、不同的生長階段以及整個細胞周期上都有較大程度的不同(Capranico?et?al.，1992)。

對TOP2A和TOP2B基因進行序列分析，發現TOP2A的全長序列比TOP2B有更大的分歧，表明TOP2B基因有更強的選擇性。TOP2B基因含有36個外顯子，其分子量大于49Kb，比TOP2A多了一個外顯子(Shapiro?and?Senapathy，1987)。內在外顯子長度從44到232bp不同，平均的內在外顯子長度是135bp，TOP2A與TOP2B相似。

TOP2A和TOP2B兩種基因的的蛋白產物在細胞內發揮著較為重要的作用，它們可以作為一些廣泛用于治療人類癌癥的藥物的細胞內靶子，接受這些藥物并與它們結合，使它們在細胞內發揮功能。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34。

由于如上所述DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽——DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)1O.34的方法。

本發明的另—個目的是提供針對本發明的多肽——DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽——DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與DNA拓撲異構酶II-beta(TOP2B)10.34異常相關的疾病的方法。