[發明專利]一種新的多肽——人CCR4相關蛋白9.5和編碼這種多肽的多核苷酸

在審

• 申請號: 00115846.5
• 申請日: 2000-05-24
• 公開（公告）號: CN1324862A
• 公開（公告）日: 2001-12-05
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人CCR4相關蛋白9.5，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

碳代謝副產物阻遏蛋白(CCR4)是一種生物體內普遍存在的轉錄調控蛋白，通過在體內形成多亞基復合物，它可以影響很多基因的表達。

研究發現，盡管CCR4并不結合于DNA，但它在與非正常的DNA結合功能域結合后可以刺激轉錄過程。與其他轉錄調節因子相比，CCR4是受葡萄糖調節的。在兩個轉錄調控功能域中，一個是葡萄糖相關的，它包含有一個富含谷氨酸鹽-脯氨酸的結構區，這與很多真核生物中發現的轉錄因子所含有的結構區十分相似。研究發現，如CCR4缺少了亮氨酸重復結構和C末端，則其兩個轉錄調控功能域不能組成有功能的CCR4。因此，亮氨酸重復結構和C末端對于連接兩個轉錄調控功能域形成完整的CCR4有關鍵作用。(Mol?Cell?Biol?1994Jul；14(7):4522-31)

有進一步的研究結果顯示，CCR4所含的亮氨酸重復結構除了對形成完整的CCR4有作用外，還對CCR4與其相關蛋白相互結合作用有重要作用。(Mol?Cell?Biol1994?Jul；14(7):4522-31)；(Genetics?1992?Dec；132(4):951-62)

酵母的CCR4蛋白是一些非發酵生長的調控基因(如葡萄糖-抑制乙醇脫氫酶ADH2等)表達過程中不可缺少的一種蛋白，并且也是SPT6和SPT10突變基因的校正基因，而SPT6和SPT10對于保持染色質的穩定性有作用。(Mol?Cell?Biol?1994Jul；14(7):4522-31)

免疫沉淀反應的結果表明，CCR4可以與至少4種蛋白形成復合物而起作用。(Mol?Cell?Biol?1994?Jul；14(7):4522-31)

CCR4相關蛋白--CAF1(POP2)是CCR4復合物的一種組成蛋白，它的人CCR4相關蛋白在很多生物體內已有發現，比如人，線蟲，爪蟾，鼠，酵母等等。CCR4相關蛋白(CAF1)在生物體內的主要功能是調控轉錄過程。CCR4相關蛋白(CAF1)的具體結構請參閱相關文獻。(Mol?Cell?Biol?1995?Jul；15(7):3487-95)

盡管對CCR4相關蛋白的結構和功能的研究還不是十分清楚，但根據已有的研究，我們已經知道CCR4相關蛋白的部分功能。

CCR4通過形成多亞基復合物，可以影響很多酵母中的基因的表達。細胞周期調節激酶(DBF2)在細胞有絲分裂末期向G1期過度的過程中有重要作用，DBF2與CCR4以及CAF-1/POP2共同形成復合物，在細胞周期的基因表達和后來的有絲分裂的基因轉錄過程中有重要作用。(EMBO?J?1997?Sep?1；16(17):5289-98)

人的B細胞移位蛋白(BTG1)是一種腫瘤抑制因子，因為其過度表達抑制了NIH?3T3細胞的增殖。碳代謝副產物阻遏蛋白(CCR4)的結合因子(hCAF-1)，是同源于鼠的CAF-1，釀酒酵母的CAF-1/POP2的。在體外，hCAF-1/BTG1復合物的形成依賴于BTG1(Ser-159)的p34cdc2激酶位點的磷酸化。hCAF-1/BTG1復合物對于細胞分裂和細胞增殖有重要且明顯的調控作用。(Biochem?J?1998?Dec?1；336(Pt2):471-81)；(Wilcox,Scott,Subramanian,Ross,Adams-Burton,Stoltenborg?and?Corjay(1995)Circulation?92,I34-I35)

根據氨基酸同源比較的結果，本發明的多肽被推斷鑒定為人CCR4相關蛋白31(HCCR4RP31或HCAF31)，其人CCR4相關蛋白為鼠的CCR4相關蛋白(mCAF1)，它的蛋白號是U21855。

通過基因芯片的分析發現，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細胞株、LPS+的Ecv304細胞株胸腺、正常成纖維細胞1024NC、Fibroblast，生長因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門癌中，本發明的多肽的表達譜與人CCR4相關蛋白的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人CCR4相關蛋白9.5。