[發(fā)明專(zhuān)利]一種新的多肽——中心體Nek－2結(jié)合蛋白110.12和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00115805.8
• 申請(qǐng)日: 2000-05-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1324806A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/00
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/00;C07K14/435;C07K16/00;C07K16/18;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/16;A61K38/17;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽--中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

體在一百年前就已經(jīng)受到關(guān)注了，中心體結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)節(jié)都與細(xì)胞周期緊密相關(guān)(Mazia,1987；Kellogg?et?al.,1994；Tournier?and?Bornens,1994)，目前已經(jīng)得到了許多中心體相關(guān)的組分。其中Nek2就是其中之一，它屬于哺乳動(dòng)物細(xì)胞周期調(diào)節(jié)激酶，在結(jié)構(gòu)上與構(gòu)巢曲霉菌的有絲分裂調(diào)節(jié)器NIMA相似(Fryand?Nigg,1995；Lu?and?Hunter,1995a；Osmani?and?Ye,1996)。中心體的Nek-2結(jié)合蛋白1(centrosomal?Nek2-associated?protein?1,C-Nap1)是一種人類(lèi)中心體蛋白，其羧基末端能夠與Nek2發(fā)生作用，因此最初被稱(chēng)為Nek2相互作用蛋白，它是哺乳動(dòng)物中心體的核心組分。

C-Nap1是一種高分子量(281Kd)的卷曲螺旋蛋白，其結(jié)構(gòu)上含有很長(zhǎng)的卷曲螺旋區(qū)域，在區(qū)域的中心有一個(gè)鉸鏈區(qū)。只在C-Nap1氨基和羧基的末端和中心區(qū)域附近發(fā)現(xiàn)有打破螺旋結(jié)構(gòu)的Pro殘基簇，但并不影響整個(gè)結(jié)構(gòu)上的卷曲螺旋。一些其它的中心體蛋白也發(fā)現(xiàn)含有類(lèi)似的卷曲螺旋區(qū)域存在(Stearn?andWiney,1997)，表明蛋白之間的相互作用離不開(kāi)該區(qū)域，并且中心體結(jié)構(gòu)的保持也有賴(lài)于此。與Nek2相似，C-Nap1也能夠獨(dú)立地與中心體相結(jié)合，而并不依賴(lài)于微管的存在，因此它也屬于中心體的核心組分(Oegema?et?al.,1995)。

在人類(lèi)細(xì)胞中，Nek2能夠與中心體相結(jié)合，它在減數(shù)分裂中染色質(zhì)的濃縮階段起作用(Rhee?and?Wolgemuth,1997)，但是，Nek2的超表達(dá)卻并不有利于染色質(zhì)的濃縮，反而影響中心粒之間的粘連，并且能夠引起明顯的中心體分裂現(xiàn)象。C-Nap1是Nek2的磷酸化底物，不論在體外還是在活細(xì)胞中，其羧基端都能夠被Nek2磷酸化。

Nek2的表達(dá)是組織特異性的，能夠在睪丸中大量表達(dá)，在精子發(fā)生階段上顯示出一種特異性的表達(dá)方式(Rhee?and?Wolgemuth,1997；Tanaka?et?al.,1997)。然而，C-Nap1的表達(dá)卻是廣泛的，在所有的組織細(xì)胞中都發(fā)現(xiàn)有相當(dāng)?shù)谋磉_(dá)，包括在睪丸中，但是其表達(dá)水平卻是很低量的，甚至只有幾個(gè)拷貝。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、LPS+的Ecv304細(xì)胞株胸腺、正常成纖維細(xì)胞1024NC、Fibroblast，生長(zhǎng)因子刺激，1024NT、疤痕成fc生長(zhǎng)因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生長(zhǎng)因子刺激，1013HC、膀胱癌建株細(xì)胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌細(xì)胞株、胎皮、脾臟、前列腺癌、空腸腺癌、賁門(mén)癌中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與中心體Nek-2結(jié)合蛋白1的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類(lèi)似。本發(fā)明被命名為中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12。

由于如上所述中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12以及其片段、類(lèi)似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽--中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽--中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與中心體Nek-2結(jié)合蛋白110.12異常相關(guān)的疾病的方法。