[發明專利]一種新的多肽——人RNA解螺旋酶12和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請號: 00115692.6
• 申請日: 2000-05-16
• 公開（公告）號: CN1323896A
• 公開（公告）日: 2001-11-28
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/14;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/34;C12Q1/68;A61K38/46
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本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人RNA解旋酶12，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

在細胞的眾多活動中，RNA結構的調控如：前體RNA的剪接、剪接體的裝配、蛋白翻譯等都是必需的。這些過程通常由各種不同的RNA解螺旋酶來調節完成。不同來源的RNA解螺旋酶構成了一很大的蛋白家族，在很多RNA起重要作用的生物系統中均可檢測到該酶的存在。它們廣泛地分布于從原核生物(包括病毒)到低等及高等生物的各組織器官中，參與細胞核及線粒體的分裂、RNA的編輯、rRNA的加工、轉錄起始、，細胞核mRNA的轉運及mRNA的降解等過程。RNA解螺旋酶被認為是細胞發育及分化過程中的重要因子，其中的一些還在病毒單鏈RNA的轉錄及復制過程中起作用[Arri?Eisen,John?C.Lucchesi,Bioessays,1998,20:634-641]。其在生物體內為癌癥、神經系統疾病及免疫系統疾病的診斷、預防及治療提供了有效的手段。

RNA解螺旋酶根據其結構上的特征分為不同的亞家族，亞家族Ⅰ和亞家族Ⅱ。所有的解螺旋酶均含有兩個Walker型NTP結合結構域---A結構域(或叫ATP酶A結構域)和B結構域(或稱ATP酶B結構域)。亞家族Ⅰ中的成員含有保守的ATP酶A結構域：GXXXXGKT。后發現，有一些RNA解螺旋酶的ATP酶結構域A在一些氨基酸位點上有突變，其ATP酶A結構域的保守序列為：AXXGXGKT，因而將這些蛋白分為一類，即亞家族Ⅱ。在亞家族Ⅱ中，有部分蛋白在ATP酶結構域B中含有保守的DEAD盒，后發現該亞家族中的成員按其DEAD盒的不同又可分為三種不同的亞類，即DEAD盒蛋白、DEAH盒蛋白及DEXH盒蛋白[Angelika?Luking,Ulf?Stahl?et?al.,1998,Crit.Rev.Biochem.Mol.Biol.,33:259-296]。

1995年，Zhang?S.等人從牛內克隆得到了NDHⅡ蛋白，該蛋白為含DEAD盒的RNA解螺旋酶家族的成員。在其結構域Ⅱ中含有DEIH基序，該蛋白與人解螺旋酶A及果蠅的Mle蛋白亦有較高的同源性。這三者均被認為在細胞核DNA及RNA的代謝過程中起重要作用[Zhang?S.,Maacke?H.et?al.,1995,J.Biol.Chem.,270:16422-16427]。RNA解螺旋酶A在生物體內即具有RNA螺旋酶活性又具有DNA螺旋酶活性。因而，該酶在RNA的轉錄調節過程中起著重要的生物學功能[Lee?CG,Eki?T?et?al.,1998,Genomics,47:365-371]。由上可知，含DEAD盒的RNA解螺旋酶蛋白家族的成員在RNA的轉錄調節過程中起著重要的生物學功能，該類蛋白的表達異常將引發一些因轉錄調節異常而引起的代謝紊亂癥、各種免疫系統疾病及一些相關組織的惡性疾病。

通過基因芯片的分析發現，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細胞株、PMA-的Ecv304細胞株、未饑餓的L02細胞株、砷刺激1小時的L02細胞株、砷刺激6小時的L02細胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發明的多肽的表達譜與人RNA解旋酶95的表達譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發明被命名為人RNA解旋酶12。

由于如上所述人RNA解旋酶12蛋白在調節細胞分裂和胚胎發育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人RNA解旋酶12蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人RNA解旋酶12蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾1病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人RNA解旋酶12以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人RNA解旋酶12的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人RNA解旋酶12的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人RNA解旋酶12的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人RNA解旋酶12的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人RNA解旋酶12的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。