[發(fā)明專(zhuān)利]一種新的多肽——人泛素－結(jié)合酶10.2和編碼這種多肽的多核苷酸

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00115604.7
• 申請(qǐng)日: 2000-05-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1322817A
• 公開(kāi)（公告）日: 2001-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛裕民;謝毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海博德基因開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/52
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/52;C12N9/00;C12N15/63;C07K16/40;C12Q1/25;C12Q1/68;A61K38/53
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人泛素-結(jié)合酶10.2，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

蛋白質(zhì)的水解起著維持細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)平衡的重要作用。在一些特定的信號(hào)通路中，信號(hào)分子的降解是使信號(hào)通路正常進(jìn)行的必要條件。例如，在有絲分裂中，cyclin(細(xì)胞周期蛋白)必須在正確的時(shí)間被降解，否則會(huì)引起細(xì)胞增殖的紊亂。泛素-蛋白酶水解系統(tǒng)在降解cyclin中起著重要作用。

泛素首先在-COOH末端與泛素活化酶E1形成硫脂鍵而被活化，然后被轉(zhuǎn)移給E2或UBC(泛素-結(jié)合)酶家族的一員，最后直接或間接通過(guò)泛素-蛋白連接酶E3把泛素轉(zhuǎn)移到目標(biāo)蛋白的賴(lài)氨酸殘基上。

泛素-結(jié)合酶(UBC)的作用是催化泛素與目標(biāo)蛋白的共價(jià)連接。在大部分的生物中，UBC都以多種形式出現(xiàn)，意味著UBC在許多不同的細(xì)胞活動(dòng)中的重要作用。UBC的半胱氨酸殘基在泛素-硫脂鍵的形成中是必須的。通過(guò)對(duì)許多UBC蛋白序列的同源比較發(fā)現(xiàn)，有一個(gè)半胱氨酸殘基附近的序列是高度保守的。這一段序列是：[FYWLSP]-H-[PC]-[NH]-[LIV]-x(3,4)-G-x-[LIV]-C-[LIV]-x-[LIV]其中C是活性位點(diǎn)的殘基。

泛素-蛋白酶水解系統(tǒng)不但作用于cyclin的降解，在許多其他的蛋白代謝中也發(fā)揮著重要的作用。例如，在酵母中，G-蛋白耦連的受體和運(yùn)輸?shù)鞍自谂浠Y(jié)合時(shí)會(huì)被泛素修飾。蛋白酶體不識(shí)別這些被泛素化的蛋白。而在哺乳動(dòng)物質(zhì)膜上的許多受體和至少一個(gè)離子通道會(huì)被泛素化而受到負(fù)調(diào)控。

泛素系統(tǒng)還在降解受損傷的蛋白上起作用。泛素標(biāo)記因?yàn)檫^(guò)氧化、神經(jīng)毒或者突變而導(dǎo)致異常的蛋白，使蛋白酶得以識(shí)別并水解之。不能正確水解泛素化的蛋白會(huì)破壞細(xì)胞滲透壓。在許多的神經(jīng)疾病中都發(fā)現(xiàn)了泛素化的蛋白聚集。在阿爾茲海墨氏癥、瘋牛病、舞蹈病和小腦共濟(jì)失調(diào)等組織的內(nèi)涵體/溶酶體中也能發(fā)現(xiàn)泛素化蛋白的聚集。

有些真核生物的表達(dá)調(diào)控基因，例如NF-B/IB,p53,c-Jun,Notch，甾體調(diào)控的結(jié)合蛋白和MAT2也受到泛素-蛋白酶系統(tǒng)的調(diào)控。因此泛素-蛋白酶系統(tǒng)在基因表達(dá)中也起一定的作用。另外，也有報(bào)道指出泛素-蛋白酶系統(tǒng)的失調(diào)會(huì)引起肌肉癱瘓。

通過(guò)基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時(shí)的L02細(xì)胞株、砷刺激6小時(shí)的L02細(xì)胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小腸、胎大腸、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎腎、胎脾、胎腦、胎肺以及胎心中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人泛素-結(jié)合酶10的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類(lèi)似。本發(fā)明被命名為人泛素-結(jié)合酶10.2。

由于如上所述人泛素-結(jié)合酶10.2蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機(jī)體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過(guò)程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過(guò)程的人泛素-結(jié)合酶10.2蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人泛素-結(jié)合酶10.2蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開(kāi)發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供分離的新的多肽--人泛素-結(jié)合酶10.2以及其片段、類(lèi)似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人泛素-結(jié)合酶10.2的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有編碼人泛素-結(jié)合酶10.2的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供生產(chǎn)人泛素-結(jié)合酶10.2的方法。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供針對(duì)本發(fā)明的多肽--人泛素-結(jié)合酶10.2的抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了針對(duì)本發(fā)明多肽--人泛素-結(jié)合酶10.2的模擬化合物、拮抗劑、激動(dòng)劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供診斷治療與人泛素-結(jié)合酶10.2異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：