[發明專利]一種新的多肽——人含纖維素結合結構域的蛋白10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請號: 00115478.8
• 申請日: 2000-04-27
• 公開（公告）號: CN1320631A
• 公開（公告）日: 2001-11-07
• 發明（設計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權）人: 上海博德基因開發有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P1/00;A61P31/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明描述了一種新的多肽--人含纖維素結合結構域的蛋白10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應用。

纖維素和木聚糖的微生物降解需要多種不同類型酶的催化及作用，如內切葡聚糖酶、纖維二糖水解酶(外切葡聚糖酶)或木聚糖酶等。從結構上說，纖維素酶及木聚糖酶的蛋白序列中均含有一催化結構域，其通過一富含脯氨酸及羥基氨基酸的的短鏈與纖維素結合結構域結合在一起，共同調控生物體內多種纖維素、木聚糖等糖類的分解代謝過程。

研究發現，在多種纖維素酶中均含有纖維素結合結構域。該結構域存在于纖維素酶或木聚糖酶蛋白序列的N末端或C末端，其在生物體內負責調控酶與纖維酸等糖類的結合，以促進糖代謝過程的完成。該結構域中含有四個保守的半胱氨酸殘基，涉及二硫鍵的形成。其結構組成如下圖所示：‘C’：為保守的半胱氨酸殘基，涉及二硫鍵的形成。‘*’：為酶的一致性序列片段區域。人們已從真菌至高等生物等多種生物體內克隆得到了多種不同多糖結合蛋白，發現所有這些蛋白的氨基酸序列中均含有一保守的結構域，該結構域在每一個蛋白中均存在四個重復的序列片段，其中還含有如下所示的保守的一致性序列片段：一致性序列片段：C-G-G-X(4,7)-G-X(3)-C-X(5)-C-X(3,5)-[NHG]-X-[FYWM]-X(2)-Q-C；其中四個保守的半胱氨酸殘基即涉及二硫鍵的形成[N.R.Gilkes,B.Henrissat?et?al.,1991,Microbiological?Reviews,55:303-315]。該保守的一致性序列片段及結構域的突變或表達異常將導致酶在體內的作用異常，即影響相關多糖在體內的代謝異常，從而引發各種相關的物質代謝紊亂性疾病。

本發明的新的人含纖維素結合結構域的蛋白10亦含有如上所示的纖維素酶及木聚糖酶的高度保守的纖維素結合結構域，且與之具有相似的結構及功能特征。該蛋白在體內亦參與調控多種多糖的代謝分解過程，其突變或表達異常將導致相關多糖的代謝紊亂，進而引發各種相關的代謝紊亂性疾病。該蛋白在體內與多種糖類代謝紊亂性疾病的發生密切相關，其還可用于診斷及治療上述各種疾病。

由于如上所述人含纖維素結合結構域的蛋白10蛋白在機體內重要功能中起重要作用，而且相信這些調節過程中涉及大量的蛋白，因而本領域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人含纖維素結合結構域的蛋白10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人含纖維素結合結構域的蛋白10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態下的作用提供了基礎。這種蛋白可能構成開發疾病診斷和/或治療藥的基礎，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發明的一個目的是提供分離的新的多肽--人含纖維素結合結構域的蛋白10以及其片段、類似物和衍生物。

本發明的另-個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人含纖維素結合結構域的蛋白10的多核苷酸的重組載體。

本發明的另一個目的是提供含有編碼人含纖維素結合結構域的蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主細胞。

本發明的另一個目的是提供生產人含纖維素結合結構域的蛋白10的方法。

本發明的另一個目的是提供針對本發明的多肽--人含纖維素結合結構域的蛋白10的抗體。

本發明的另一個目的是提供了針對本發明多肽--人含纖維素結合結構域的蛋白10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發明的另一個目的是提供診斷治療與人含纖維素結合結構域的蛋白10異常相關的疾病的方法。

本發明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中1182-1445位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1871位的序列。

本發明另外涉及一種含有本發明多核苷酸的載體，特別是表達載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細胞，包括轉化、轉導或轉染的宿主細胞；一種包括培養所述宿主細胞和回收表達產物的制備本發明多肽的方法。