[發(fā)明專利]一種新的多肽——人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10和編碼這種多肽的多核苷酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 00115208.4
• 申請日: 2000-03-28
• 公開（公告）號: CN1315406A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 毛裕民;謝毅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海博德基因開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K14/00;C07K16/18;C07K16/00;C07H21/00;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/63;C12N15/64;C12P21/00;C12Q1/68;G01N33/68;A61K38/17;A61K38/16;A61K31/7088;A61K39/395;A61P35/00;A61P7/00;A61P37/00;A61P31/00;A61P31/18
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本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明描述了一種新的多肽--人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10，以及編碼此多肽的多核苷酸序列。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的制備方法和應(yīng)用。

轉(zhuǎn)導(dǎo)素是一種可激活cGMP特異性磷酸二酯酶的G蛋白。Beta-轉(zhuǎn)導(dǎo)素(G-beta)是G蛋白三個亞基中的一個，它在轉(zhuǎn)膜受體產(chǎn)生的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起承上啟下的作用。Alpha亞基結(jié)合并水解GTP；beta亞基和gamma亞基則是GTP置換GDP以及膜錨定和識別受體所必須的。

在高級真核生物中，G-beta屬于一個小的多基因含有大約340個保守氨基酸殘基的家族。G-beta結(jié)構(gòu)由8個串聯(lián)的大約40個氨基酸的重復(fù)子組成，每一個重復(fù)子包含一個中心的Trp-Asp基元(WD-40)。這樣的重復(fù)結(jié)構(gòu)存在于許多蛋白中。重復(fù)結(jié)構(gòu)的數(shù)目在這些蛋白中由5-8變化。在G-beta和G-beta類似蛋白中，重復(fù)子結(jié)構(gòu)幾乎分布于整個序列中，而在其它蛋白中，它們只分布于N末端，中心部分或C末端。

WD-40可以分為兩個相對保守的元素，A和B，它們的序列和長度都是不一樣的。WD-40結(jié)構(gòu)中最重要的特征是A元素的LxGH和B元素的[D,N]XXXXX[W,F,Y][D,N]模式。連接區(qū)域，n1和n2包含了許多帶電荷的氨基酸殘基和脯氨酸。單個重復(fù)單位之間的距離非常大，但n1=8的氨基酸似乎導(dǎo)致總的重復(fù)子的長度大約是42-43個氨基酸。

D-40家族蛋白分布廣泛：有的在核內(nèi)，有的在質(zhì)膜上，有的作為細(xì)胞骨架成分。

通過基因芯片的分析發(fā)現(xiàn)，在胸腺、睪丸、肌肉、脾臟、肺、皮膚、甲狀腺、肝、PMA+的Ecv304細(xì)胞株、PMA-的Ecv304細(xì)胞株、未饑餓的L02細(xì)胞株、砷刺激1小時的L02細(xì)胞株以及前列腺組織中，本發(fā)明的多肽的表達(dá)譜與人beta轉(zhuǎn)導(dǎo)素41的表達(dá)譜非常近似，因此二者功能也可能類似。本發(fā)明被命名為人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10。

由于如上所述人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育等機體重要功能中起重要作用，而且相信這些調(diào)節(jié)過程中涉及大量的蛋白，因而本領(lǐng)域中一直需要鑒定更多參與這些過程的人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10蛋白，特別是鑒定這種蛋白的氨基酸序列。新人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10蛋白編碼基因的分離也為研究確定該蛋白在健康和疾病狀態(tài)下的作用提供了基礎(chǔ)。這種蛋白可能構(gòu)成開發(fā)疾1病診斷和/或治療藥的基礎(chǔ)，因此分離其編碼DNA是非常重要的。

本發(fā)明的一個目的是提供分離的新的多肽--人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10以及其片段、類似物和衍生物。

本發(fā)明的另一個目的是提供編碼該多肽的多核苷酸。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10的多核苷酸的重組載體。

本發(fā)明的另一個目的是提供含有編碼人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10的多核苷酸的基因工程化宿主細(xì)胞。

本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10的方法。

本發(fā)明的另一個目的是提供針對本發(fā)明的多肽--人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10的抗體。

本發(fā)明的另一個目的是提供了針對本發(fā)明多肽--人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10的模擬化合物、拮抗劑、激動劑、抑制劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供診斷治療與人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10異常相關(guān)的疾病的方法。

本發(fā)明涉及一種分離的多肽，該多肽是人源的，它包含：具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性變體、生物活性片段或衍生物。較佳地，該多肽是具有SEQ?ID?NO:2氨基酸序列的多肽。

本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，它包含選自下組的一種核苷酸序列或其變體：

(a)編碼具有SEQ?ID?No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸；

(c)與(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，該多核苷酸的序列是選自下組的一種：(a)具有SEQ?ID?NO:1中177-443位的序列；和(b)具有SEQ?ID?NO:1中1-1367位的序列。

本發(fā)明另外涉及一種含有本發(fā)明多核苷酸的載體，特別是表達(dá)載體；一種用該載體遺傳工程化的宿主細(xì)胞，包括轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或轉(zhuǎn)染的宿主細(xì)胞；一種包括培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞和回收表達(dá)產(chǎn)物的制備本發(fā)明多肽的方法。

本發(fā)明還涉及一種能與本發(fā)明多肽特異性結(jié)合的抗體。

本發(fā)明還涉及一種篩選的模擬、激活、拮抗或抑制人轉(zhuǎn)導(dǎo)素10蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本發(fā)明的多肽。本發(fā)明還涉及用該方法獲得的化合物。