[發(fā)明專利]增效蛋白在原核生物中的表達(dá)及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 00114666.1
• 申請(qǐng)日: 2000-06-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN1331288A
• 公開(kāi)（公告）日: 2002-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟小林;徐進(jìn)平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N15/33;C07K14/005;A01N63/00;//;C12R119)
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種工程菌株E.ColiM15(pQE-TnGVCp80)，該工程菌株已提交到中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，其保藏編號(hào)為：CCTCC?M20009。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程菌株，其特征在于：這種菌株含粉紋夜蛾顆粒體病毒增效蛋白N末端截短蛋白基因，并能在原核生物中表達(dá)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的工程菌株，其特征在于所含的重組表達(dá)載體由下列DNA元件構(gòu)成：

(1).粉紋夜蛾顆粒體病毒增效蛋白N末端截短蛋白基因；

(2).大腸桿菌質(zhì)粒復(fù)制起始點(diǎn)；

(3).氨芐青霉素抗性基因；

(4)六個(gè)連續(xù)組氨酸編碼區(qū)。

4.一種構(gòu)建權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的工程菌株的方法，其特征在于：

用BamHI/PstI分別雙酶切質(zhì)粒pQE和重組質(zhì)粒pGEM-T/En，并經(jīng)0.7％低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠電脈純化回收2.18kb目的基因片段，用T₄?DNA連接酶于16℃水浴連接過(guò)夜；轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞E.coli?M15(pREP4)，經(jīng)氨芐青霉素和卡那霉素雙抗平板篩選得到E.coli?M15(pQE-TnGVEnCp80)。

5.一種用權(quán)利要求1-3所述的工程菌株生產(chǎn)粉紋夜蛾顆粒體病毒增效蛋白的方法，其特征在于：將重組獲得的攜帶粉紋夜蛾顆粒體病毒增效蛋白N末端截短蛋白的工程菌株CCTCCM20009單菌落挑到內(nèi)含100μg/ml的氨芐青霉素和25μg/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃，200rpm過(guò)夜培養(yǎng)，以1∶20比例接種到含上述雙抗500ml?LB培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)其濃度達(dá)到OD₆₀₀＝0.7-0.9時(shí)，加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷至終濃度1mM，于37℃，200rpm誘導(dǎo)表達(dá)5hr，收獲菌液，4000rpm離心10min，收集菌體沉淀，再按常規(guī)方法即可獲得粉紋夜蛾顆粒體病毒增效蛋白質(zhì)N末端截短蛋白。

6.權(quán)利要求1-3所述的工程菌株與昆蟲(chóng)病毒、蘇蕓金芽胞桿菌、阿維菌素或其它生物殺蟲(chóng)劑制備成復(fù)合生物殺蟲(chóng)劑在農(nóng)林業(yè)用于病蟲(chóng)的生物防治，或單獨(dú)用于轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉防治棉鈴蟲(chóng)。